Негізгі айырмашылық – YAC және BAC векторлары
Векторлар молекулалық клондауда қолданылады. Векторды басқа жасушаға бөгде генетикалық материалды тасымалдау құралы ретінде әрекет ететін ДНҚ молекуласы ретінде анықтауға болады. Құрамында бөтен ДНҚ бар вектор рекомбинантты ДНҚ деп аталады және оны қабылдаушы организмде репликациялау және экспрессиялау мүмкіндігі болуы керек. Ашытқы жасанды хромосома (YAC) және бактериялық жасанды хромосома (BAC) - клондауға қатысатын векторлардың екі түрі. YAC пен BAC арасындағы негізгі айырмашылық мынада: YAC ашытқы жасушаларына генетикалық материалдардың үлкен сегменттерін енгізу үшін ашытқы хромосомасының белгілі бір аймағын қолданатын жасанды түрде салынған векторлық жүйе, ал BAC - E. белгілі бір аймағын қолданатын жасанды түрде салынған векторлық жүйе.coli хромосомасы ДНҚ-ның үлкен сегменттерін E. coli жасушаларына енгізу үшін.
YAC векторлары дегеніміз не?
YAC (ашытқы жасанды хромосома) – жасанды түрде салынған хромосома, ол бөгде ДНҚ-ның үлкен сегментін тасымалдауға және ашытқы жасушаларының ішінде репликациялауға қабілетті. Оның центромера, теломерлер, сондай-ақ репликация мен тұрақтылық үшін маңызды болып табылатын автономды репликацияланатын тізбектері бар. YAC сонымен қатар оны тиімді клондау векторына айналдыру үшін селективті маркер немесе маркерлер мен шектеу орындары болуы керек. 1000 кб пен 2000 кб аралығындағы үлкен тізбекті YAC ішіне енгізуге және ашытқыға жіберуге болады. YAC трансформациясының тиімділігі өте төмен.
01-сурет: YAC векторы
BAC векторлары дегеніміз не?
Бактериялық жасанды хромосома (BAC) - молекулалық клондау үшін жасанды түрде жасалған хромосома. Оның E. coli F плазмидасының белгілі аймақтары бар және ол дөңгелек және өте ширатылған. BAC бактерияларға, әсіресе E. coli-ге ДНҚ фрагменттерін клондау үшін әзірленген. Ол өлшемі 300 кб дейінгі ДНҚ фрагменттерін көтере алады. YAC-пен салыстырғанда, BAC клондау кірістірулерінің өлшемдері кішірек. BAC 1992 жылы әзірленді және ол өзінің тұрақтылығы мен құрылысының қарапайымдылығына байланысты әлі де танымал. BAC вакцина жасауда да пайдалы.
02-сурет: молекулалық клондаудағы BAC векторы
YAC және BAC векторларының айырмашылығы неде?
YAC және BAC векторлары |
|
| YAC – клондау мақсатында ашытқы ДНҚ-сы қолданылатын гендік инженерлік хромосома. | BAC – клондау мақсатында E. coli ДНҚ пайдаланатын гендік инженерлік ДНҚ молекуласы. |
| Жынысы | |
| YAC геномдық ДНҚ-ның үлкен фрагменттерін ашытқыға клондау үшін жасалған. | BAC үлкен геномдық фрагменттерді ішек таяқшасына клондау үшін әзірленген. |
| Кірістіру ұзындығы | |
| YAC құрамында мегабаза өлшеміндегі геномдық кірістірулер болуы мүмкін.(1000 кб – 2000 кб). | BAC 200–300 кб немесе одан аз кірістірулерді тасымалдай алады. |
| Құрылыс | |
| YAC ДНҚ бұзылмаған күйде тазартылуы қиын және YAC векторлық жүйесін құру үшін жоғары концентрация қажет. | BAC бұзылмаған күйде тазартылады және оңай құрастырылады. |
| Химеризм | |
| YAC жиі химерикалық болады. | BAC сирек химерикалық болады. |
| Тұрақтылық | |
| YAC тұрақсыз. | BAC тұрақты. |
| Өзгерістер | |
| Ашытқыларды рекомбинациялау өте мүмкін және әрқашан белсенді болып қалады. Сондықтан ол YAC жүйесінде жоюларды және басқа реттеулерді жасай алады. | Е. coli рекомбинациясының алдын алады және қажет болғанда қосылады. Осылайша, ол BAC файлдарындағы қажетсіз қайта реттеулерді азайтады. |
| Қызмет көрсету | |
| Рекомбинантты YAC-ларды манипуляциялау, әдетте, келесі манипуляция үшін YAC-ны E. coli-ге тасымалдауды талап етеді. Демек, бұл көп еңбекті қажет ететін процесс. | BAC модификациясы тікелей E. coli-де болады. Сондықтан ДНҚ тасымалдаудың қажеті жоқ. Демек, процесс көп күш жұмсамайды. |
Қорытынды – YAC және BAC векторлары
YAC иесі ағзаға ДНҚ-ның үлкен фрагменттерін клондау қабілетіне байланысты клондау процестеріндегі маңызды зерттеу құралына айналды. Дегенмен, YAC-ның бірнеше кемшіліктері бар, мысалы, құрылыс қиындықтары, химеризм, тұрақсыздық және т.б. сияқты векторлар. Сондықтан бұл мәселелерді шешу үшін ғалымдар BAC векторларын жасады. BAC E. coli хромосомасының арнайы аймақтарын пайдалана отырып құрастырылған. Бұл тұрақты вектор және оны оңай құруға болады. Дегенмен, BAC өңдей алатын ДНҚ ұзындығы YAC ұзындығынан 20 есеге дейін аз. Бұл YAC және BAC векторлық жүйелері арасындағы айырмашылық. Қазіргі уақытта зертханаларда YAC емес, BAC басымырақ.
