Ник-трансляция мен түпкілікті толтыру арасындағы негізгі айырмашылық мынада: ник-трансляция әртүрлі будандастыру реакциялары үшін таңбаланған ДНҚ зондтарын жасайтын процесс, ал соңғы толтыру - бір тізбекті саңылауларға нуклеотидтерді қосу арқылы доғал фрагменттерді жасайтын әдіс.
Ник аудармасы және соңын толтыру - молекулалық биологияда қолданылатын екі әдіс. Ник трансляциясы арнайы нуклеотидтер тізбегін анықтау үшін будандастыруға арналған зондтарды таңбалау үшін қолданылады. Соңындағы толтыру бір жіпті ілгектері бар жабысқақ ұштары бар доғал фрагменттерді жасау үшін қолданылады. Екі әдіс те үлкен маңызға ие және олар үнемі молекулалық зерттеу зертханаларында орындалады.
Ник аудармасы дегеніміз не?
Ник аудармасы әр түрлі молекулалық биологиялық әдістерге арналған таңбаланған зондтарды дайындау үшін пайдаланылатын маңызды әдіс, мысалы, блоттау, in situ будандастыру, флуоресцентті in situ будандастыру, т.б. Бұл ДНҚ таңбалаудың in vitro әдісі. ДНҚ зондтары нақты ДНҚ немесе РНҚ тізбегін анықтау үшін қолданылады. Белгіленген зондтың көмегімен нуклеин қышқылының күрделі қоспасынан арнайы фрагменттерді белгілеуге немесе көруге болады. Сондықтан таңбаланған зондтар әртүрлі әдістерді қолдана отырып дайындалады. Ник трансляциясы - DNase 1 және DNA-полимераза 1 ферменттерінің көмегімен таңбаланған зондтарды шығаратын осындай әдістердің бірі.
01-сурет: Ник аудармасы
Ник трансляция процесі DNase 1 ферментінің белсенділігінен басталады. DNase 1 нуклеотидтер арасындағы фосфодиэфирлік байланыстарды ыдырату арқылы қос тізбекті ДНҚ фосфатты діңгегіне никтерді енгізеді. Ник жасалғаннан кейін нуклеотидтің бос 3′ OH тобы түзіліп, оған ДНҚ-полимераза 1 ферменті әсер етеді. ДНҚ-полимераза 1-нің 5′-тен 3′ дейінгі экзонуклеазалық белсенділігі нуклеотидтерді никтен ДНҚ тізбегінің 3′ бағытына қарай жояды.
Бір мезгілде ДНҚ-полимераза 1 ферментінің полимеразалық белсенділігі жұмыс істейді және жойылған нуклеотидтерді ауыстыру үшін нуклеотидтерді қосады. Егер нуклеотидтер таңбаланса, ауыстыру таңбаланған нуклеотидтермен жүреді және ол сәйкестендіру үшін ДНҚ-ны белгілейді. Ақырында, бұл жаңадан синтезделген таңбаланған ДНҚ әртүрлі будандастыру реакцияларында зонд ретінде пайдаланылуы мүмкін.
Соңында толтыру дегеніміз не?
Соңғы толтыру – молекулалық биологияда доғал фрагменттерді жасау үшін қолданылатын әдіс. Шектеу ас қорытуы саңылаулары бар фрагменттерді шығарады. Бұл фрагменттер плазмидтік векторларға қосылу үшін үйлесімді болмауы мүмкін. Сәйкес келмейтін ұштарды біріктіруге мүмкіндік беру үшін векторлар жиі кесіледі. Сондықтан полимерлеуге шаблон ретінде асып кетуді пайдаланып комплементарлы жіпке нуклеотидтерді қосу арқылы асып кетуі бар фрагменттерді өшіруге болады. Бұл процесс соңғы толтыру ретінде белгілі.
ДНҚ полимераза I және T4 ДНҚ полимеразасының Кленов фрагменті сияқты ДНҚ полимеразалары соңғы толтыруды катализдейді. Олар толтыру үшін нуклеотидтерді қосады (5′ → 3′) және шайнау үшін (3′ → 5′). Жабысқақ ұштары толтырылғаннан кейін олар доғал болады және олар векторға қосылуға дайын.
Сонымен қатар, соңғы толтыруды ДНҚ молекулаларын таңбалау үшін пайдалануға болады. Дегенмен, оны тек жабысқақ ұштары бар ДНҚ молекулаларын таңбалау үшін пайдалануға болады. Ник-трансляциямен салыстырғанда, соңын толтыру ДНҚ бұзылыстарын сирек тудыратын жұмсақ әдіс.
Nick Translation және End Filling арасындағы қандай ұқсастықтар бар?
- Ник трансляциясы да, соңын толтыру да молекулалық биологиялық әдістер.
- Оларды зондтарды белгілеу үшін пайдалануға болады.
- Екеуі де in vitro
Nick Translation және End Filling арасындағы айырмашылық неде?
Ник аудармасы – будандастыру үшін таңбаланған зондтарды жасайтын әдіс. Керісінше, ұшты толтыру - векторларға байлау үшін доғал фрагменттерді жасайтын әдіс. Сонымен, бұл ник аудармасы мен соңғы толтыру арасындағы негізгі айырмашылық. Сонымен қатар, Ник аудармасы 5'-3' экзонуклеаза белсенділігін пайдалануды талап етеді, ал соңғы толтыру үшін 5'-3' экзонуклеаза белсенділігі қажет емес.
Төмендегі инфографика ник аудармасы мен соңын толтыру арасындағы айырмашылықтарды толығырақ көрсетеді.
Қорытынды – Nick Translation vs End Filling
Ник трансляциясы – радиоактивті таңбаланған нуклеотидтерді ДНҚ-ға енгізетін әдіс. Ол DNase 1 және E. coli ДНҚ полимераза 1 ферменттерінің белсенділігіне негізделген таңбаланған зондтарды синтездейді. Соңында толтыру, екінші жағынан, доғал фрагменттерді шығаратын әдіс. Фрагменттердің ұштары жабысқақ болған кезде (бір жіпті саңылаулар) векторларға байлану үшін оларды доғал ұштарға айналдыру керек. Соңындағы толтыру үйлесімді нуклеотидтерді қосады және оларды байлау үшін үйлесімді ету үшін ұшты үзінділерді жасайды. Осылайша, бұл ник аудармасы мен соңғы толтыру арасындағы айырмашылықты қорытындылайды.
