Элиспот пен Элиспот арасындағы негізгі айырмашылық мынада: Элиза ферментпен байланысты иммуносорбент талдауы болып табылады, ол секрецияланған сигналдық белоктардың жалпы концентрациясын анықтайды, ал Элиспот - жеке цитокиндер бөлетін жасушаларды анықтайтын ферментке байланысты иммуносорбенттік талдау.
Элиса және Элиспот - бұл медицинада, өсімдіктер патологиясында, биотехнологияда және әртүрлі фармацевтикалық салаларда кеңінен қолданылатын екі ферментпен байланысты иммуносорбенттік талдау. Бұл әдістерде ақуыз талданатын зат оған қарсы бағытталған антидене арқылы анықталады. Элиза - зертханаларда қолданылатын ең танымал ферменттік иммуносорбент талдауы. Екінші жағынан, Элиспот - бұл Элизаның орнына пайдаланылмайтын, бірақ зертханаларда Элизаға қосымша қолданылатын ферментке байланысты иммуносорбенттік талдау.
Elisa Assay дегеніміз не?
Elisa - бөлінетін сигналдық ақуыздардың жалпы концентрациясын анықтайтын ферментке байланысты иммуносорбенттік талдау. Бұл кеңінен қолданылатын аналитикалық биохимиялық талдау, оны 1971 жылы Энгвалл мен Перлман алғаш рет сипаттаған. Бұл әдіс осы арнайы ақуызға қарсы бағытталған антиденелерді пайдалана отырып, сұйық үлгідегі белгілі бір ақуыздың бар-жоғын анықтау үшін ферменттік иммундық талдаудың қатты фазалық түрін пайдаланады. Бұл талдау медицинада, өсімдіктер патологиясында және биотехнологияда жиі қолданылатын диагностикалық құрал болып табылады.
ИФА тестінің механизмі
ИФА сынағының көпшілігінде антигеннің белгісіз мөлшері басында қатты тірекке (микролитрлік пластина) иммобилизацияланады. Содан кейін сәйкес бастапқы антидене қатты тірек бетіне қолданылады. Бұл антидене антигенмен комплекс түзеді (антиген-антидене кешені). Антигенмен байланысқан бастапқы антиденені биоконъюгация арқылы ферментпен байланысқан екіншілік антидене арқылы анықтауға болады. Элиза сынағының соңғы сатысында ферменттің субстраты бар зат қосылады. Антигенге бастапқы антидененің дұрыс байланысуы болса, субстрат анықталатын түс өзгерісін жасайды. Сайып келгенде, бұл үлгідегі антигеннің санын анықтайды.
01-сурет: Элизаның әртүрлі түрлері
Сонымен қатар Элизаға қатысты әртүрлі тәсілдер бар, мысалы, тікелей Элиза және жанама Элиза. Қазіргі уақытта микобактерия туберкулезі, ротавирус, В гепатиті вирусы, С гепатиті вирусы, E.coli, АИТВ және SARS-CoV-2 тудыратын энтеротоксин сияқты адам қоздырғыштарын анықтау үшін әртүрлі Элиза сынақтары қолданылады.
Элиспотты талдау дегеніміз не?
Элиспот - жеке цитокин бөлетін жасушаларды анықтайтын ферментке байланысты иммуносорбенттік талдау. Сесил Черкинский алғаш рет 1983 жылы ELISpot-ты сипаттады. Бұл бір жасуша үшін цитокин секрециясының жиілігін сандық өлшеуге бағытталған талдау түрі. Ол сондай-ақ биологиялық немесе химиялық ақуыз анализаторын анықтау үшін антиденелерді пайдаланатын әдіс ретінде жіктеледі. Флуороспот талдауы – бірнеше талдағыштарды (көбірек құпия ақуыздар) талдау үшін флуоресценцияны пайдаланатын Элиспоттық талдаудың нұсқасы.
Элиспот сынағының механизмі
Бұл механизмде бастапқыда микролитрлік пластиналардың ойықтарына цитокинге спецификалық моноклоналды антиденелер қосылады. Содан кейін ұңғымаларға бақыланатын қажетті ұяшықтар қосылады. Кейінірек жасушалар инкубацияланады. Жасуша инкубациялау кезінде жасушаларға кез келген тітіркендіргіштерге реакция жасауға және цитокин шығаруға рұқсат етіледі. Жасушалар цитокинге спецификалық моноклональды антиденелермен қоршалғандықтан, инкубацияланған жасушалар шығарған цитокиндер антиденелерге бекітіледі.
02-сурет: Элиспот талдауы
Осы цитокинге спецификалық моноклоналды антиденелерді анықтау үшін ұңғымаға биотинленген спецификалық анықтау антиденелері қосылады. Биотинденген спецификалық анықтау антиденелері ұңғымаларда цитокинге спецификалық моноклональды антиденелерді ұстайды. Сонымен қатар, анықтаушы антиденелермен байланысу үшін ұңғымаларға стрептавидин-фермент конъюгаттары қосылады. Соңғы кезеңде ұңғымаларға арнайы субстраттар қосылады. Фермент конъюгаттары мен субстраттарының реакциялары ұңғымаларда айқын дақтарды тудырады. Бұл ерекше нүктелер автоматтандырылған ELISpot оқу құралында оқылады. Сайып келгенде, бұл цитокин секрециясының жиілігін қосымша есептейді.
Элиза мен Элиспоттың қандай ұқсастықтары бар?
- Олардың екеуі де ферментке байланысты иммуносорбенттік талдаулар.
- Екі талдау да арнайы ақуыз анализаторларын анықтайды.
- Бұл талдаулар ақуыз анализаторларын анықтау үшін арнайы антиденелерді пайдаланады.
- Екі талдау да ферменттер мен субстраттарды пайдаланады.
- Олар медициналық зертханаларда диагностикалық құрал ретінде пайдаланылады.
Элиза мен Элиспоттың айырмашылығы неде?
Elisa - бөлінетін сигналдық ақуыздардың жалпы концентрациясын анықтайтын ферментке байланысты иммуносорбенттік талдау. Екінші жағынан, Элиспот - бұл жеке цитокинді бөлетін жасушаларды өлшейтін ферментке байланысты иммуносорбенттік талдау. Сонымен, бұл Элиза мен Элиспот арасындағы негізгі айырмашылық. Сонымен қатар, Элиза тестінде антиген алдымен микролитрлік ұңғымаларға иммобилизацияланады. Керісінше, Элиспоттық сынақта антидене алдымен микролитрлік ұңғымаларға иммобилизацияланады. Осылайша, бұл Элиза мен Элиспот арасындағы тағы бір айырмашылық.
Төмендегі инфографика Элиза мен Элиспот арасындағы айырмашылықтың егжей-тегжейлі талдауын кесте түрінде ұсынады.
Қорытынды – Элиза және Элиспот
Элиса және Элиспот - бұл медицинада, өсімдіктер патологиясында, биотехнологияда және әртүрлі фармацевтика салаларында кеңінен қолданылатын екі ферментпен байланысты иммуносорбенттік талдау. Элиза өлшенетін лигандқа қарсы бағытталған антиденелерді пайдалана отырып, сұйық үлгіде лигандтың (белоктың) болуын анықтайды. Элиспот талдауы иммундық жауаптарды бақылаудың кең таралған әдісі болып табылады. Ол антиденелерді пайдалана отырып, жеке цитокин бөлетін жасушаларды анықтайды. Бұл иммундық талдау және биоталдау әдісі. Осылайша, бұл Элиза мен Элиспот арасындағы айырмашылықтың қысқаша мазмұны.
