Негізгі айырмашылық – ДНҚ мен РНҚ экстракциясы
ДНҚ мен РНҚ-ны зерттеу молекулалық биология, биотехнология және генетиканың негізгі ұғымдарын түсіну үшін маңызды аспектілер болып табылады. Осы зерттеулер кезінде эксперименттік процедураларды орындау үшін таза ДНҚ және РНҚ үлгілерін алу қажет. ДНҚ мен РНҚ экстракциясының басты айырмашылығы мынада: ДНҚ экстракциясы процесі ДНҚ-ны тазартады, ал РНҚ экстракциясы РНҚ-ны тазартады. ДНҚ экстракция процесі үш түрлі кезеңнен тұрады: жасуша лизисі және мембраналық липидтер мен ақуыздардың катаболизмі, концентрлі тұз ерітіндісімен катаболиттердің жиналуы және ДНҚ-ның этанолмен тұнбаға түсуі. Үш қадамдық процедура екі қосымша қадамнан тұруы мүмкін. РНҚ тазарту процесі төрт түрлі кезеңнен тұрады: жасуша лизисі үшін гуанидий тиоцианатын қосу, рибонуклеазаларды қоса, ақуызды денатурациялау, хлороформ мен фенолды қосу арқылы РНҚ-ны бөлу және этанол көмегімен тұнбаны жуу.
ДНҚ экстракциясы дегеніміз не?
ДНҚ экстракциясы - үлгідегі ДНҚ-ны тазарту үшін қолданылатын физикалық және химиялық процесс. ДНҚ экстракциясы молекулярлық биология және сот сараптамасы контекстіндегі маңызды аспект болып табылады. Процесс үш негізгі қадамнан тұрады. Бастапқыда қызығушылық ұяшықтары алынуы керек. Содан кейін жасушаның лизисі жасуша мембранасын бұзу үшін жеңілдетіледі, ол жасушаны ашады және ДНҚ-мен бірге цитоплазманы ашады. Беттік-белсенді заттарды немесе басқа жуғыш заттарды жасуша мембранасынан липидтерді лизилеу үшін қолдануға болады, ал ақуыздар протеазалармен катаболизденеді. Бұл қосымша қадам. Жасуша лизистен кейін, катаболизденген молекулалардың жиналуы концентрлі тұз ерітінділері арқылы жеңілдетіледі. Одан кейін ДНҚ-дан қоқыс шоғырларын бөлетін ерітіндіні центрифугалау жүргізіледі. Бұл кезеңде дифференциалданған ДНҚ жасуша циклі кезінде қолданылатын реагенттермен және тұздармен араласады.
01-сурет: ДНҚ экстракциясы
Оны әрі қарай тазарту үшін келесі қадамдарды қолдануға болады. Әдістердің бірі этанолды тұндыру болып табылады, ол мұзды суық этанолды бөлінген ДНҚ үлгісімен араластыруды қамтиды. ДНҚ спиртте ерімейді және осылайша ДНҚ молекулаларының біріктірілуіне байланысты түйіршіктер түзеді. Бұл процесте иондық күшті арттыру арқылы тұндыру дәрежесін арттыру үшін натрий ацетаты қосылады. Бұл үшін этанолды тұндыру процесінен басқа, фенол-хлороформды экстракциялау процесі де индукциялануы мүмкін. Бұл әдісте фенол үлгідегі ақуыздарды денатураттайды. Центрифугадан кейін денатуратталған ақуыздар органикалық фазада қалады, ал хлороформмен араласқан ДНҚ молекулалары сулы фазада болады. Хлороформ фенол қалдықтарын кетіреді. Экстракция аяқталғаннан кейін ДНҚ TE буферінде немесе ультра таза суда ерітіледі.
РНҚ экстракциясы дегеніміз не?
РНҚ тазарту - бұл РНҚ биологиялық үлгіден тазартылатын процесс. Жасушалар мен ұлпаларда рибонуклеазаның болуына байланысты бұл процесс күрделі. Рибонуклеаза ферментінің РНҚ-ны тез ыдырату қабілеті бар. Рибонуклеазалардың химиялық табиғаты өте тұрақты, сондықтан оларды инактивациялау қиын. Рибонуклеазаларды бейтараптандыру опция болып табылады. Бұл фермент жасушалар мен ұлпаларда барлық жерде болатындықтан, РНҚ экстракциясының арнайы әдістері жасалған. Көптеген әдістердің ішінде кең таралған әдіс - гуанидиний тиоцинат-фенол-хлороформ экстракциясы.
02-сурет: РНҚ экстракциясы
Гуанидиний тиоцинат-фенол-хлороформды экстракциялау әдісі центрифугалауға және фазаларды бөлуге байланысты. Центрифугаланатын қоспа сулы үлгіден және фенол мен хлороформнан тұратын суға қаныққан ерітіндіден тұрады. Центрифугадан кейін ерітінді бейтарап рН жағдайында (рН 7-8) жоғарғы сулы фазадан және төменгі органикалық фазадан тұрады. РНҚ сулы фазада болады. Органикалық фаза әдетте фенолда еріген ақуыздардан және хлороформда еріген липидтерден тұрады. Хаотропты агент (су молекулалары арасындағы сутектік байланыстарды бұзу мүмкіндігі бар молекула) қосылады; бұл гуанидиний тиоцианаты деп аталады. Бұл агент РНҚ-ны ыдырататын және жасуша лизисіне қатысатын рибонуклеазаларды қамтитын ақуыздарды денатурациялау қабілетіне ие. Ол сонымен қатар рРНҚ-ны рибосомалық ақуыздардан бөледі. РНҚ тазартудың соңғы сатысы сулы фазаның тұнбасын этанолмен жуу болып табылады. РНҚ сұйық азот арқылы да тазартылуы мүмкін.
ДНҚ мен РНҚ экстракциясының қандай ұқсастықтары бар?
- Экстракциялау процесі де фенол және хлороформ сияқты зиянды химиялық заттарды пайдаланады.
- Центрифугалау екі процесс үшін де маңызды әдіс болып табылады.
- Этанол тұнбаны жуу және тазартылған ДНҚ немесе РНҚ алу үшін қолданылады.
ДНҚ мен РНҚ экстракциясының айырмашылығы неде?
ДНҚ және РНҚ экстракциясы |
|
| ДНҚ-ны экстракциялау – бұл организмнен немесе үлгіден ДНҚ алу процесі. | РНҚ экстракциясы - үлгіден РНҚ бөліп алатын процесс. |
| Қадамдар | |
| ДНҚ экстракциясы процесі екі қосымша қадамы бар үш түрлі қадамнан тұрады. | РНҚ алу процесі төрт түрлі қадамнан тұрады. |
| Реагенттер | |
| ДНҚ экстракциясы үшін беттік белсенді заттар, протеазалар (міндетті емес), спирт, хлороформ, фенол, натрий ацетаты қолданылады. | Гуанидий тиоцианаты, хлороформ, фенол, этанол РНҚ экстракциясы үшін қолданылады. |
Қорытынды – ДНҚ және РНҚ экстракциясы
ДНҚ және РНҚ экстракциясы молекулалық биология, генетика және биотехнологияны зерттеуге арналған тәжірибелік процедуралардың маңызды аспектілері болып табылады. Екі процесте де ұқсас реагенттер бар, бірақ РНҚ экстракциясы рибонуклеазалардың белсенділігін төмендететін гуанидий тиоцианаты деп аталатын арнайы реагентті пайдаланады. Бұл ДНҚ мен РНҚ экстракциясының негізгі айырмашылығы.
ДНҚ және РНҚ экстракциясының PDF нұсқасын жүктеп алу
Сіз осы мақаланың PDF нұсқасын жүктеп алып, сілтеме жазбасына сәйкес офлайн мақсаттарда пайдалана аласыз. PDF нұсқасын мына жерден жүктеп алыңыз: ДНҚ мен РНҚ экстракциясының арасындағы айырмашылық
