Өсімдіктер мен жануарлардың ДНҚ экстракциясының негізгі айырмашылығы - өсімдік ДНҚ экстракциясы кезінде жануарлардың ДНҚ экстракциясы кезінде жасушалық мазмұнды босату үшін құрғақ мұзда немесе сұйық азотта ұлпаны ұнтақтау арқылы жасуша қабырғасын бұзу қажет., жануарлар жасушаларында жасуша қабырғасы болмағандықтан, бұл қадамды орындау қажет емес.
Геномдық ДНҚ – өсімдік және жануарлар жасушаларының генетикалық материалы. Геномдық ДНҚ әрбір жеке өсімдікке немесе жануарға тән. Жақсы сапалы ДНҚ-ның ДНҚ экстракциясы молекулалық зерттеулердің міндетті шарты болып табылады. Ағзалардың ДНҚ-сы ауруларды анықтау, диагностикалау, спецификалық гендер мен тізбектерді анықтау, криминалистикалық мақсаттар, әке болуды анықтау, геномды секвенирлеу, дәрілік заттарды әзірлеу және т.б. ДНҚ экстракциялау әдісі жасушалардың түріне байланысты өзгереді – жануар жасушасы немесе өсімдік жасушасы.
Өсімдік ДНҚ экстракциясы дегеніміз не?
Өсімдік жасушаларындағы ДНҚ әртүрлі молекулалық зерттеулер үшін алынады. Ол бүтін, таза геномдық ДНҚ алу қажет. Демек, жануарлар жасушаларынан ДНҚ алу протоколдарынан ерекшеленетін ДНҚ алу протоколдарының әртүрлі түрлері бар. Себебі өсімдік жасушаларында жасушалық мазмұнды алу үшін сынуы керек жасуша қабырғасы болады.
Экстракция әдетте өсімдік тіндерін құрғақ мұзда немесе сұйық азотта ерітінді мен пестилді пайдаланып ұнтақтау арқылы жүзеге асырылады. Содан кейін жасуша мембраналары бұзылып, жасушалық мазмұн экстракциялық буферге шығарылады. Бұл әдетте жуғыш заттың көмегімен жасалады; SDS (натрий додецил сульфаты) немесе CTAB (цетилтриметиламмоний бромиді) буфері. Шығарылған ДНҚ EDTA сияқты хелаттау агентінің көмегімен эндогендік нуклеазалардан қорғалған. Сонымен қатар, ақуыздар ДНҚ-дан хлороформ немесе фенол арқылы бөлінеді.
01-сурет: Өсімдік ДНҚ экстракциясы
Өсімдіктер полисахаридтер мен полифенолдарды, соның ішінде флавоноидтарды және басқа қайталама метаболиттерді синтездейді. Бұл қосылыстар таза геномдық ДНҚ экстракциясына кедергі жасайды. Демек, өсімдіктердің ДНҚ-сын алу хаттамаларының көпшілігі осы қосылыстарды жою үшін цезий хлоридінің тығыздығының градиентті әдісі сияқты басқа қадамды қамтиды.
ДНҚ экстракциялау протоколдарының көпшілігі ДНҚ экстракциясы үшін жаңа жапырақ үлгілерін пайдалануды ұсынады. Кейбір әдістерге сұйық азот және фенол сияқты қауіпті химиялық заттар кірмейді. CTAB (цетил триметиламмоний бромиді) протоколы - жоғары сапалы өсімдік геномдық ДНҚ-сын экстракциялауды жеңілдететін танымал өсімдік ДНҚ алу протоколы. Бұл өсімдік ДНҚ алудың қарапайым, қауіпсіз, сенімді және үнемді әдісі. Басқа әдістердің көпшілігі CTAB әдісінің өзгертілген нұсқалары.
Жануарлардың ДНҚ экстракциясы дегеніміз не?
Жануарлардың ДНҚ экстракциясы – молекулалық талдау үшін жануарлар жасушаларынан геномдық ДНҚ алу. Өсімдік ДНҚ экстракциясынан айырмашылығы, жасуша қабырғасының ыдырауы жануарлар жасушалары үшін қажет емес, өйткені оларда жасуша қабырғасы жоқ. Қан жасушалары - әртүрлі мақсаттарда қолданылатын жануарлар жасушаларының ең көп таралған түрі.
02-сурет: ДНҚ экстракциясы
Фенол-хлороформ әдісі - қан жасушалары үшін ең жақсы таңдаулардың бірі. Бұл әдістен ДНҚ алу кезінде ДНҚ шығымы мен сапасы жоғары болады. Бұл сұйық-сұйық ДНҚ экстракциясының протоколы және бұл әдіс ДНҚ молекулаларын араласпайтын ерітінділердегі ерігіштігі негізінде бөледі. Фенол, хлороформ және изоамил спирті бұл әдістің негізгі үш ингредиенттері болып табылады.
Өсімдіктер мен жануарлардың ДНҚ экстракциясының қандай ұқсастықтары бар?
- Өсімдіктердің де, жануарлардың да ДНҚ-сын алу кезінде жасуша мембраналары бұзылуы керек.
- ДНҚ эндогендік нуклеазалардан қорғалуы керек.
- Сонымен қатар, ДНҚ-ның қырылуына жол бермеу керек.
- Өсімдік ДНҚ мен жануарлар ДНҚ-сын алу үшін коммерциялық жинақтар бар.
- Өсімдіктер мен жануарлардың ДНҚ алу әдістерінің көпшілігі үздіксіз модификация мен стандарттауды қажет етеді.
Өсімдіктер мен жануарлардың ДНҚ экстракциясының айырмашылығы неде?
Өсімдіктер мен жануарлардың ДНҚ экстракциясының негізгі айырмашылығы мынада: өсімдік ДНҚ-сын алу жасуша қабырғасын бұзу үшін құрғақ мұзда немесе сұйық азотта өсімдік тінін ұнтақтауды қажет етеді, ал жануарлардың ДНҚ экстракциясы бұл қадамды қажет етпейді, өйткені олар жануар. жасушаларда жасуша қабырғасы болмайды. CTAB әдісі - өсімдік ДНҚ-сын алудың ең жақсы әдістерінің бірі, ал фенол-хлороформ әдісі - жануарлардың ДНҚ-сын алудың ең жақсы әдістерінің бірі.
Төменде өсімдіктер мен жануарлардың ДНҚ-сын алу арасындағы айырмашылықтар инфографикасында берілген.
Қорытынды – Өсімдік пен Жануарлардың ДНҚ экстракциясы
Әртүрлі жасуша түрінен ДНҚ алудың әртүрлі әдістері бар. Сондықтан өсімдік ДНҚ-сын алу хаттамалары жануарлар жасушасының ДНҚ-сын алу хаттамаларынан ерекшеленеді. Өсімдік ДНҚ экстракциясы жасуша қабырғасының, жасуша мембранасының және ядролық мембрананың бұзылуын талап етеді, ал жануарлардың ДНҚ экстракциясы жасуша мембранасының және ядролық мембрананың бұзылуын талап етеді. Ең бастысы, жануар жасушасының ДНҚ экстракциясы құрғақ мұзда немесе сұйық азотта ұнтақтау арқылы жасуша қабырғаларының бұзылуын қажет етпейді. Осылайша, бұл өсімдіктер мен жануарлардың ДНҚ экстракциясы арасындағы негізгі айырмашылық.
