Кумасси мен күміс бояуының арасындағы негізгі айырмашылық мынада: кумасси бояуы - бұл кумасси тамаша көк дақ пайдаланатын ақуызды бояу әдісі, ал жолақпен бояу - күміс дақ пайдаланатын ақуызды бояу әдісі.
Белокты бөлу және сәйкестендіру протеомды талдаудағы маңызды қадамдар болып табылады. Олар гельдік электрофорезден кейін жоғары ажыратымдылықтағы ақуызды сипаттауды қажет етеді. Аниондық бояғыштар (кумасси тамаша көк), металл катиондары (имидазол-мырыш), күміс бояуы және флуоресцентті бояғыштар және т.б. сияқты түрлі дақтарды қамтитын көптеген бояу әдістері бар. Кейде радиоактивті зондтарды да қолдануға болады. Бояу техникасын таңдау қарапайымдылыққа, зертханада бейнелеу жабдығының болуына және т.б. байланысты.
Кумасси бояуы дегеніміз не?
Кумасси бояуы - бұл кумассидің тамаша көк дағын пайдаланатын ақуызды бояу әдісі. Бұл әдетте комасси көк техникасы деп аталады. Coomassie brilliant blue - ең танымал анионды ақуыз-бояғыш. Бұл дақ әдетте орташа сезімталдықта жақсы сандық сызықтылығы бар барлық дерлік ақуыздарды бояйды. Coomassie тамаша көк дақ барлық дерлік ақуыздармен спецификалық емес байланысады. Екі түрлі кумасси жарқыраған көк дақ нұсқасы бар: R-250 және G-250. R-250 қысқа бояу уақытын ұсынады, ал G-250 сезімтал және қоршаған ортаға зиянсыз рецептураларда қол жетімді.
01-сурет: Coomassie бояуы
Кумасси бояғыштары масс-спектрометриялық зерттеулерде және ақуызды анықтау зерттеулерінде өте танымал. Сонымен қатар, био-қауіпсіз кумасси бояуы қазіргі уақытта нарықта қол жетімді Coomassie көк G-250-нің қауіпті емес формуласы болып табылады. Бұл құрамның артықшылығы - шаю және бояу үшін тек су қажет. Био-қауіпсіз кумасси дақтары кәдімгі кумасси көк G-250-ге баламалы сезімталдықты ұсынады, бірақ R-250 кумасси дақтарынан жақсырақ. Сонымен қатар, оның әдеттегі Coomassie көк G-250-ге қарағанда қарапайым және жылдам бояу протоколы бар. Кумасси көк бояуының кемшілігі күміс бояумен салыстырғанда оның сезімталдығы төмен. Coomassie көк бояуы күміс бояуға қарағанда шамамен 50 есе сезімтал. Дегенмен, байланыстырудың қарапайымдылығына байланысты көптеген зерттеулерде ол артықшылыққа ие.
Күміс бояу дегеніміз не?
Күміс бояу – күміс дақ пайдаланатын ақуызды бояу әдісі. Күміс бояу агарозаны да, полиакриламидті гельдерді де бояу үшін қолданылады. Агароздық гельдердегі ақуыздың күміс бояуын алғаш рет 1973 жылы Керени мен Галляс жасаған. Кейінірек ол SDS-PAGE-де қолданылатын полиакриламидті гельдердегі ақуыздарға бейімделді. Қазіргі уақытта күміс бояу ДНҚ немесе РНҚ бояу үшін де қолданылады. Гельдерді бояу үшін осы әдісте гельдер күміс нитратының ерітіндісімен инкубацияланады. Күміспен бояу ақуыздар бар жерлерді қоңырдан қараға дейін бояйды.
02-сурет: күміс бояу
Күміс бояуының қарқындылығы ақуыздың бастапқы құрылымына байланысты. Сонымен қатар, қолданылатын ыдыстардың тазалығы мен реагенттердің тазалығы да күміс бояуының сапасына әсер етуі мүмкін. Дегенмен, күміспен бояудың кемшілігі оның барлық белоктарды, әсіресе гликопротеидтерді және олардың бүйірлік тізбектеріне қосылған үлкен модификацияланған топтары бар белоктарды анықтай алмауы болып табылады.
Кумасси мен күміс бояуының қандай ұқсастықтары бар?
- Кумасси және күміс бояу - ақуызды бояуда қолданылатын екі әдіс.
- Олар белоктарды да, ДНҚ-ны да бояй алады.
- Бояу әдістерінің екеуінің де кемшіліктері бар.
- Бұл әдістерде бекіту, бояу және бояу сияқты ұқсас қадамдар бар.
Кумасси мен күміс бояуының айырмашылығы неде?
Кумасси бояуы - бұл кумассидің тамаша көк дағын пайдаланатын ақуызды бояу әдісі, ал жіппен бояу - күміс дақ пайдаланатын ақуызды бояу әдісі. Осылайша, бұл Coomassie мен күміс бояу арасындағы негізгі айырмашылық. Сонымен қатар, Coomassie бояуы күміс бояуға қарағанда сезімталдығы төмен.
Төмендегі инфографикада Coomassie және күміс бояу арасындағы айырмашылықтар қатар салыстыру үшін кесте түрінде берілген.
Қорытынды – Кумасси және күміс бояу
Белоктарды визуализациялау үшін ақуызға тән бояуды байланыстыру немесе түс тудыратын химиялық реакцияны орындауға болады. Бұл ақуызды бояу деп аталады. Кумасси және күміс бояуы - ақуызды бояуда қолданылатын екі әдіс. Coomassie бояу техникасы кумасси жарқыраған көк дақтарды, ал жіппен бояу үшін күміс дақтарды пайдаланады. Демек, бұл Coomassie мен күміс бояу арасындағы негізгі айырмашылық.
