Бензоназа мен ДНаз арасындағы айырмашылық

2024 Автор: Alex Aldridge | [email protected]. Соңғы өзгертілген: 2023-12-17 13:43

Негізгі айырмашылық – бензоназа және DNase

Нуклеин қышқылдарының ыдырауы көптеген молекулалық биология әдістері үшін маңызды. Ол ДНҚ мен РНҚ-ның қажетсіз фрагменттерінен құтылу үшін рекомбинантты ДНҚ технологиясында кеңінен қолданылады. Нуклеин қышқылын ыдырататын ферменттер нуклеазалар деп аталады және олар қажетті функцияға байланысты әр түрлі болуы мүмкін. ДНҚ-ны ыдырататын нуклеазалар ДНҚ деп аталады, ал РНҚ-ны ыдырататындар РНҚ деп аталады. Бұл ферменттер негізінен таза ДНҚ, РНҚ немесе ақуыздарды бөліп алу үшін in vitro молекулалық сынақтар жүргізілетін in vitro эксперименттерінде қолданылады. Бензоназалар - ДНҚ мен РНҚ-ны ыдырататын нуклеазалардың бір түрі, ал ДНҚ-лар тек ДНҚ-ны бұзады. Бұл бензоназа мен DNase арасындағы негізгі айырмашылық.

Бензоназа дегеніміз не?

Бензоназа – Serratia marcescens тұқымынан алынған гендік-инженерлік эндонуклеаза. Бұл фермент өнеркәсіптік ауқымда E. coli хосттарында өндіріледі. Бензоназа қос тізбекті ДНҚ, сызықтық ДНҚ, шеңберлі ДНҚ және бір тізбекті РНҚ-ны ыдыратуға қабілетті. Осылайша бензоназа коммерциялық маңызды болып табылады. Бензоназа ферменті - екі маңызды дисульфидтік байланысы бар 245 бірдей аминқышқылдары, ~30 кДа суббірліктері бар ақуыз димері. Бензоназа нуклеин қышқылдарын 5' ұшында ыдыратады және бос 5' ұштары бар фрагменттерге әкеледі. Бензоназа нуклеин қышқылдарын кез келген реттілікпен бөле алады, бірақ ГК-ға бай аймақтарды жақсы көреді.

Безоназа -20 ^{0C температурада сақталады. Фермент белсенділігі үшін оңтайлы рН 8,0 – 9,2 болып табылады. Бензоназаның қолданылуына белок 2D гель электрофорезі үшін үлгі дайындау кіреді, мұнда Бензоназа байланысқан нуклеин қышқылдарын жояды және рекомбинантты ақуыз препараттарынан нуклеин қышқылының ластаушы заттарын кетіреді. Ол сонымен қатар ақуыз сығындыларының тұтқырлығын азайту және жасуша қоспасындағы жасушалардың жиналуын болдырмау үшін қолданылады.}

ДНаз дегеніміз не?

DNase – тек қос тізбекті ДНҚ-ны ыдыратуға қабілетті нуклеаза, гидролитикалық фермент. ДНазалардың екі негізгі түрі бар: DNase I және DNase II. DNase I 5' бос ұштары бар полинуклеотидтерді шығару үшін қос тізбекті ДНҚ-ны бөлуге қатысады. DNase II қос тізбекті ДНҚ-ны ыдыратуға қатысады, ұштары 3' бос немесе асып түсетін полинуклеотидті жіптерді түзеді.

DNase I

DNase I 7,0 – 8,0 арасындағы оңтайлы рН деңгейінде жұмыс істейді. Ферменттің белсенділігі Ca²⁺, Mg²⁺ немесе Mn^{2+ кіретін көптеген иондық кофакторларға байланысты. Mg}2+ ^{және Mn}2+ ^{белсенділігі DNase I қызметін шешеді. Mg} қатысуымен 2+^{, DNase I dsDNA-ның әрбір тізбегін дербес бөледі. Бұл кездейсоқ түрде орын алады. Керісінше, Mn}2+, ^{болған кезде фермент екі ДНҚ тізбегін шамамен бір жерде ажыратады. Бұл бөліну ДНҚ фрагменттерінің екі түрін өндіруге әкеледі; бір түрі доғал ұштары бар және бір немесе екі нуклеотидті асып түсетін басқа түрі.}

02-сурет: DNase

DNase II

DNase II 4,5-5,0 оңтайлы рН деңгейінде жұмыс істейді және DNase I сияқты оның белсенділігі үшін екі валентті металл иондары қажет. DNase II механизмі үш негізгі қадамнан тұратыны белгілі.

1. ДНҚ омыртқасында бірнеше бір тізбек үзілуі индукцияланады.
2. Қышқылда еритін нуклеотидтер мен олигонуклеотидтер түзіледі.
3. Сызықты емес гиперхромдық ығысу соңғы фазада орын алады.

DNase ферментінің негізгі тежегіштеріне металл хелаторлары, өтпелі металдар және натрий додецил сульфаты және β – меркаптоэтанол сияқты химиялық заттар жатады.

ДНҚ-ның негізгі қолданбаларына ДНҚ-сыз РНҚ сығындылары мен ақуыз сығындыларын дайындау және in vitro транскрипция эксперименттері кезінде үлгі ДНҚ-ны жою жатады.

Бензоназа мен ДНаздың қандай ұқсастықтары бар?

• Екеуі де гидролиздік ферменттер.
• Екеуі де нуклеаза.
• Екеуі де нуклеин қышқылдарының фосфодиэфирлік байланыстарын ыдырату арқылы қатысады.
• Екеуі де ферменттің белсенділігін сақтау үшін оңтайлы рН және сақтау температурасын қажет етеді.
• Ферменттердің ингибиторларына хелатизаторлар, өтпелі металдар және жуғыш заттар жатады.
• Қолданбалар негізінен ДНҚ, РНҚ және ақуыздардың жоғары таза сығындыларын алуға бағытталған.
• Екі ферментті де гендік инженерия арқылы жасауға болады.

Бензоназа мен ДНаздың айырмашылығы неде?

Бензоназа және DNase
Бензоназа – қос тізбекті ДНҚ, сызықтық ДНҚ, айналмалы ДНҚ және РНҚ-ны ыдыратуға қабілетті фермент.	DNase – қос тізбекті ДНҚ-ны ыдыратуға қабілетті фермент.
Ферментке арналған субстрат
ДНҚ да, РНҚ да бензоназаның субстраты болып табылады.	ДНҚ - DNase субстраты.
Құрылым
Бензоназаның оңтайлы рН диапазоны 7,0 -8,0	DNase I оңтайлы рН диапазондары 7,0 – 8,0 және DNase II 4,5 – 5,0.

Қорытынды – бензоназа және DNase

Нуклеаза ферменттері молекулалық биология мен гендік инженерияға қатысты әртүрлі эксперименттік процедураларда кеңінен қолданылады. Бензоназа және ДНаз - нуклеазалардың екі түрі. Бензоназа ДНҚ мен РНҚ-ны ыдыратуға қатысады, ал ДНҚ қос тізбекті ДНҚ-ны ыдыратуға қатысады. Бұл бензоназа мен DNase арасындағы негізгі айырмашылық. Қазіргі уақытта бұл екі нуклеаза түрі де максималды өндіру үшін оңтайландырылған жоғары сапалы ферменттер беретін рекомбинантты ДНҚ технологиясы арқылы өндіріледі.

Benzonase vs DNase бағдарламасының PDF нұсқасын жүктеп алу

Сіз осы мақаланың PDF нұсқасын жүктеп алып, сілтеме жазбасына сәйкес офлайн мақсаттарда пайдалана аласыз. PDF нұсқасын мына жерден жүктеп алыңыз Бензоназа мен DNase арасындағы айырмашылық