Хроматофокустау мен изоэлектрлік фокустау арасындағы негізгі айырмашылық мынада: хроматофокустау ион алмастырғыш шайырларды пайдаланатын бағандық хроматография әдісінің бір түрі, ал изоэлектрлік фокустау иммобилизацияланған рН градиентті гельдерді пайдаланатын электрофорез әдісінің бір түрі.
Хроматофокустау және изоэлектрлік фокустау - белоктарды изоэлектрлік нүктелеріне қарай бөлетін екі әдіс. Хроматофокустың да, изоэлектрлік фокустың да шешуші күші бар. Хроматофокустау - жоғары ажыратымдылықтағы бағандық хроматография әдісі, ал изоэлектрлік фокустау - электрофоретикалық бөлу әдісі. Сонымен қатар, хроматофокустау электр өрісін пайдаланбайды, ал изоэлектрлік фокустау электр өрісін қажет етеді.
Хроматофокус дегеніміз не?
Хроматофокустау – белоктарды изоэлектрлік нүктелерінің айырмашылығына қарай бөлетін жоғары элюция хроматографиясының түрі. Ол ион алмастырғыш шайыр бағанасын және ішкі дамыған рН градиентін пайдаланады. Изоэлектрлік фокустаудан айырмашылығы, хроматофокустау электр өрісін қамтымайды. Хроматофокустау - бұл тек 0,02 рН бірлігімен ерекшеленетін өте ұқсас молекулаларды шеше алатын қуатты тазарту әдісі. Сондықтан хроматофокустау өте ұқсас құрамдастарды бөлу үшін жоғары ажыратымдылық қажет болғанда соңғы жылтырату қадамы ретінде қолайлы.
Хроматофокустауда үлгі бастапқы буфермен араластыру арқылы бағанға қолданылады. Изоэлектрлік нүктесінен жоғары рН болатын белоктар теріс зарядталған және олар бағананың жоғарғы жағында қалады, ал рН изоэлектрлік нүктесінен төмен басқа белоктар бағанмен төмен қарай ауысады. Ең жоғары изоэлектрлік нүктесі бар ақуыз алдымен, ал ең төменгі изоэлектрлік нүктесі бар ақуыз бағаннан соңғы элюцияланады. Бұл әдіске ақуыздың тұнбасы және рН градиентінің сызықтылығы сияқты бірнеше факторлар әсер етеді.
Изоэлектрлік фокустау дегеніміз не?
Изоэлектрлік фокустау – әртүрлі молекулаларды изоэлектрлік нүктесіне қарай бөлетін әдіс. Ол сондай-ақ электрофокустау ретінде белгілі. Бұл әдіс көбінесе гельдегі ақуызды бөлу үшін қолданылады. Изоэлектрлік фокустауда үлгі иммобилизацияланған рН градиенті (IPG) гельдеріне қосылады. IPG гелі - рН градиентімен сополимерленген акриламидті гель матрицасы. Белоктар өздерінің изоэлектрлік нүктелерінің рН аймағын тапқанша катодқа қарай жылжиды. Ақуыз таза зарядсыз рН-ға жеткенде, миграция тоқтап, стационарлық жолақ береді. Сол сияқты әрбір ақуыз өзінің изоэлектрлік нүктесіне сәйкес рН градиентінің нүктесінде жолақ береді.
01-сурет: изоэлектрлік фокустау
Изоэлектрлік фокустау екі өлшемді гельдік электрофорездің алғашқы қадамы болып табылады. Бұл әдістемеде белоктар алдымен изоэлектрлік нүктелеріне сәйкес изоэлектрлік фокустау арқылы бөлінеді, содан кейін SDS-PAGE арқылы молекулалық салмағы бойынша бөлінеді.
Хроматофокус пен изоэлектрлік фокустың қандай ұқсастықтары бар?
- Хроматофокустау және изоэлектрлік фокустау - ажыратымдылығы жоғары екі әдіс.
- Екеуі де белоктардың изоэлектрлік нүктесіне негізделген.
- Бұл әдістер рН градиентін пайдаланады.
- Екі процедура да адам гемоглобинінің нұсқаларын сипаттау үшін ақпаратты болып табылады.
- Олар pI мәндері 0,02 рН бірлігіне дейін ерекшеленетін молекулаларды шеше алады.
Хроматофокустау мен изоэлектрлік фокустау арасындағы айырмашылық неде?
Хроматофокустау – белоктарды изоэлектрлік нүктесіне қарай бөлетін жоғары ажыратымдылықтағы баған хроматографиясының әдісі. Керісінше, изоэлектрлік фокустау - бұл капиллярда пайда болған рН градиенті бойымен электр өрісін қолдану арқылы белоктарды изоэлектрлік нүктесіне сәйкес бөлетін электрофоретикалық әдіс. Демек, бұл хроматофокустау мен изоэлектрлік фокустау арасындағы негізгі айырмашылық.
Хроматофокустау мен изоэлектрлік фокустау арасындағы тағы бір айырмашылық мынада: хроматофокустау электр өрісін қамтымайды, ал изоэлектрлік фокустау үшін электр өрісі қажет.
Қорытынды – Хроматофокус пен изоэлектрлік фокустау
Хроматофокустау және изоэлектрлік фокустау молекулалардың, әсіресе өте ұқсас молекулалардың ажырату қабілеті жоғары екі ұқсас әдіс. Хроматофокустау - бұл жоғары ажыратымдылықтағы бағандық хроматография әдісі, ал изоэлектрлік фокустау - электрофорез әдісі. Хроматофокустау изоэлектрлік фокустаудан айырмашылығы электр өрісін қамтымайды. Осылайша, бұл хроматофокустау мен изоэлектрлік фокустау арасындағы айырмашылықты қорытындылайды.
