GFP мен EGFP арасындағы негізгі айырмашылық мынада: GFP сүтқоректі емес жасушаларды молекулалық клондауға енгізілген жабайы типтегі ақуыз, ал EGFP сүтқоректілердің жасушаларында қолдануға болатын GFP жақсартылған немесе жобаланған түрі..
Молекулалық клондау – ғалымдар рекомбинантты технология арқылы белоктарды экспрессиялауда кеңінен қолданатын озық әдіс. Рекомбинантты ДНҚ технологиясында рекомбинантты векторды қабылдаушы ағзаға сәтті түрлендіру қажет. Демек, трансформация процесі кезінде қызығушылық тудыратын геннің иесіне трансформацияланған-түрленбегенін анықтау және растау керек. Мұны бағалау үшін молекулалық биологтар бірнеше әдісті қолданады. Осы әдістердің бірі репортер гені. Бұл репортер гендер дұрыс трансформаторларды таңдау үшін таңдалатын маркерлер ретінде әрекет етеді. Осылайша, жасыл флуоресцентті протеин (GFP) және күшейтілген жасыл флуоресцентті протеин (EGFP) молекулалық клондауда қолданылатын екі репортер ақуыз болып табылады.
GFP дегеніміз не?
GFP - жабайы типтегі ақуыз, құрамында 238 амин қышқылы қалдықтары және оны басқа флуоресцентті ақуыздардан ерекшелендіретін аминқышқылдарының тізбегінің бірнеше таңдалатын аймақтары бар. Сонымен қатар, бұл жабайы типтегі ақуыз бастапқыда Aequorea Victoria-дан оқшауланған; медузаның бір түрі. Дегенмен, табиғи құбылыстарда медуза белгілі бір ынталандыруға жауап ретінде жасыл түсті флуоресценция шығара алды.
Бұрын бұл тұжырымдама ғалымдарды таң қалдырды және олар оны өздерінің рекомбинантты ДНҚ технологияларында қолдануды ұйғарды. Демек, ғалымдар жабайы типтегі геннің осы мутантты түрін ген экспрессиясын зерттеуде репортер ген ретінде пайдаланды. GFP жабайы гені бөлме температурасында немесе ультракүлгін сәулесінің астында флуоресценция беретін ақуызды өндіруге қабілетті. Сондықтан трансформанттарға енгізген кезде ол флуоресценцияны білдіреді және шығарады. Егер флуоресценция трансформация процесінен кейін нәтиже берсе, бұл трансформация процесінің сәттілігін растайды. Қарапайым сөзбен айтқанда, флуоресценция сәулеленуі қызықтыратын генді хостқа тасымалдайтын вектордың сәтті трансформациясы туралы сигнал береді.
01-сурет: GFP
Осы себепті GFP ген экспрессиясының in vivo маркері ретінде әрекет етеді. Қазіргі уақытта GFP өндіру үшін гендік инженерия әдістері қолданылуда. Сондай-ақ, EGFP сияқты GFP көптеген жетілдірілген нұсқалары қол жетімді. Демек, бұл молекулалық клондау және ген экспрессиясын зерттеуде GFP тиімді пайдалануға мүмкіндік береді.
EGFP дегеніміз не?
Жақсартылған жасыл флуоресцентті протеин немесе EGFP - GFP жақсартылған нұсқасы. Қарапайым сөзбен айтқанда, EGFP-ті жабайы типтегі GFP-тің жобаланған нұсқасы ретінде анықтауға болады. GFP жабайы гені мутацияға ұшырағанда, ол пайдалы әсер береді. Демек, GFP мутацияланған гені жаңа таңбаларды білдіруге мүмкіндік береді және соның нәтижесінде біз жақсартылған сипаттамалары бар Жетілдірілген GFP шығара аламыз. Сонымен қатар, біз сәулелену немесе химиялық әдістерді қолдана отырып, жабайы типтегі GFP геніне мутацияларды сәтті енгізе аламыз. Содан кейін бұл мутацияланған гендер пайдалырақ сипаттары бар EGFP шығарады.
02-сурет: EGFP
EGFP жақсартылған сипаттамалары келесідей;
- Күшті флуоресценция сигналдарын шығаруға қабілетті.
- Сезімталдығы жоғары.
- Оны прокариоттар мен басқа төменгі деңгейдегі эукариоттардың орнына сүтқоректілердің жасушаларында қолдануға болады.
- Сонымен қатар өнімнің жоғары тазалығын қамтамасыз етеді.
Сондықтан, GFP салыстырғанда, EGFP ген экспрессиясын зерттеу үшін таңдаулы таңдау болып табылады. Дегенмен, өнім GFPмен салыстырғанда қымбатырақ.
GFP мен EGFP арасындағы қандай ұқсастықтар бар?
- GFP және EGFP - жасыл түс шығаруға қабілетті екі ақуыз
- Сондықтан екеуі де ген экспрессиясын зерттеуде репортер белок ретінде қызмет етеді.
- Сонымен қатар, рекомбинантты ДНҚ технологиясы арқылы екеуін де синтездеуге болады.
- Сонымен қатар, жақсартылған пішіндерді синтездеу үшін осы екі түрді одан әрі мутациялау оңай.
GFP мен EGFP арасындағы айырмашылық неде?
Рекомбинантты ДНҚ технологиясына қызығушылық тудыратын генмен байланысатын репортер ген. Ол рекомбинантты вектордың хостқа сәтті трансформациясы туралы сигнал береді. Мұнда GFP және EGFP - репортер ақуыздары ретінде жұмыс істейтін жасыл флюресцентті ақуыздардың екі түрі. Дегенмен, GFP мен EGFP арасындағы негізгі айырмашылық мынада: GFP жабайы түр, ал EGFP - GFP инженерлік нұсқасы. Сонымен қатар, EGFP GFP қарағанда пайдалырақ сипаттамаларға ие. Мысалы, EGFP күшті флуоресцентті жарық шығарады және GFP қарағанда сезімталырақ. GFP мен EGFP арасындағы тағы бір айырмашылық - біз оларды пайдалана алатын жүйелер. Сүтқоректілер емес жүйелер GFP пайдаланады, ал сүтқоректілер жүйелері EGFP пайдаланады.
Төмендегі инфографика GFP мен EGFP арасындағы айырмашылықты кесте түрінде көрсетеді.
Қорытынды – GFP және EGFP
GFP және EGFP - молекулалық клондау және ген экспрессиясын зерттеудегі репортер ақуыздар. GFP - жасыл флуоресцентті ақуыз болып табылатын жабайы типтегі ақуыз. Ақуыз бастапқыда Aequorea victoria медузасынан оқшауланған. Керісінше, EFGP GFP протеинінің жақсартылған түрі болып табылады. Бұл жақсартылған сипаттамалары бар жабайы типтегі мутант. Демек, EFGP жоғары сигнал күші мен жоғары сезімталдыққа ие. Сондықтан біз оны сүтқоректілердің векторларында пайдалана аламыз. Керісінше, GFP қолдану негізінен сүтқоректілер емес векторларда ғана қолданылады. Жалпы алғанда, бұл GFP мен EGFP арасындағы айырмашылық.
