Агароза мен полиакриламидті гель электрофорезінің негізгі айырмашылығы мынада: агарозды гель электрофорезі ДНҚ-ның салыстырмалы түрде үлкен фрагменттерін бөлу үшін көлденең құйылған агарозды гельдерді пайдаланады, ал полиакриламидті гель электрофорезі қысқа ядролық қышқылды бөлу үшін тігінен құйылған полиакриламидті гельдерді пайдаланады.
Электрофорез – ДНҚ, РНҚ және белоктар сияқты биомолекулаларды бөлу үшін гель матрицасы арқылы қолданылатын электр өрісін пайдаланатын техника түрі. ДНҚ, РНҚ және белоктар сияқты биомолекулаларды электрофорез арқылы бөлу заряд пен мөлшерге негізделген. Үлгілер гель ұңғымаларына жүктеледі. Кейінірек электр өрісі гельге қолданылады. Өріс теріс зарядталған молекулалардың оң электродқа қарай жылжуын тудырады. Гель матрицасы молекулалық елеуіш ретінде әрекет етеді, ол арқылы ең кішкентай молекулалар жылдам өтеді немесе қозғалады, ал үлкен молекулалар баяу қозғалады. Бұл заряд пен өлшемге байланысты молекулаларды бөлуге мүмкіндік береді. Сондықтан агароза және полиакриламидті гель электрофорезі негізінен молекулаларды өлшемі мен зарядына қарай бөлуге көмектесетін гельдік электрофорез әдістерінің екі түрі болып табылады.
Агарозды гельдік электрофорез дегеніміз не?
Агарозды гель электрофорезі - ДНҚ және РНҚ сияқты биомолекулаларды бөлу үшін агарозды гельдерді пайдаланатын әдіс. Бұл нуклеин қышқылдарын ең алдымен өлшемі бойынша бөлу үшін қолданылатын әдіс. Бұл техникада қолданылатын агароза деп аталатын негізгі қосылыс полисахарид болып табылады. Ол теңіз балдырларынан келеді. Агарозаны қайнаған буферде ерітуге болады, содан кейін көлденең ұсталатын науаға құюға болады. Науада ол плитаны қалыптастыру үшін салқындаған кезде қатып қалады. Агарозды гельдер гель қатқаннан кейін ДНҚ немесе РНҚ сияқты нуклеин қышқылдары жүктелетін ұңғымаларды жасау үшін орнына тарақпен құйылады.
01-сурет: Агарозды гель электрофорезі
Гель кейінірек сәйкес буферге батырылады және гель бойымен ток қолданылады. ДНҚ молекуланың реттік құрамына тәуелсіз біркелкі теріс зарядқа ие. Демек, ДНҚ молекулалары катодтан (-) анодқа (+) қарай жылжиды. Миграция жылдамдығы молекуланың мөлшеріне тікелей байланысты. Ең үлкен макромолекулалар гель арқылы шарлауды қиындатады. Екінші жағынан, кішірек макромолекулалар гель арқылы тез және оңай сырғып кетеді.
Полиакриламидті гельдік электрофорез дегеніміз не?
Полиакриламидті гель электрофорезі (PAGE) – биомолекулаларды бөлу үшін полиакриламидті гельдерді пайдаланатын әдіс. Бұл биологиялық макромолекулаларды, әдетте белоктар мен нуклеин қышқылдарын электрофоретикалық қозғалғыштығына қарай бөлу үшін кеңінен қолданылатын әдіс. Акрилонитрилді гидратациялау нәтижесінде нитрил гидратаза арқылы акриламид молекулалары түзіледі. Акриламид суда ериді, бос радикалдар инициаторлары қосылғаннан кейін акриламид полимерленеді, нәтижесінде полиакриламидті гель түзіледі. Әдетте акриламид концентрациясының жоғарылауы гельдегі кеуектер көлемінің азаюына әкеледі. Полиакриламидті гельдер агарозды гельдерге қарағанда тігінен құйылады.
02-сурет: Полиакриламидті гельдік электрофорез
Полиакриламидті гельдік электрофорезде молекулалар молекулалардың жоғары ретті құрылымын сақтай отырып, өздерінің табиғи күйінде жұмыс істей алады. Бұл әдіс жергілікті PAGE деп аталады. Сонымен қатар, жоғары дәрежелі құрылымды жою және молекуланы қозғалғыштығы тек ұзындығына байланысты болатын құрылымсыз молекулаға айналдыру үшін химиялық денатурант қосуға болады. Бұл түрі SDS-PAGE деп аталады.
Агароза мен полиакриламидті гель электрофорезінің қандай ұқсастықтары бар?
- Агароза және полиакриламидті гель электрофорезі гельдік электрофорез әдістерінің екі түрі болып табылады.
- Шын мәнінде олар молекулалық биологиялық әдістер.
- Екі әдіс те ДНҚ және ақуыздар сияқты биологиялық макромолекулаларды анықтау үшін қолданылады.
- Бұл әдістерді білікті техниктер немесе зерттеушілер жасайды.
- Екі әдісте де макромолекулалардың бөлінуі заряд пен өлшемге негізделген.
- Екі әдіс те ДНҚ және РНҚ сияқты нуклеин қышқылдарын бөлуге мүмкіндік береді.
Агароза мен полиакриламидті гель электрофорезінің айырмашылығы неде?
Агарозды гель электрофорезі – биомолекулаларды бөлу үшін көлденең құйылған агарозды гельдерді пайдаланатын әдіс, ал полиакриламидті гель электрофорезі – биомолекулаларды бөлу үшін тігінен құйылған полиакриламидті гельдерді пайдаланатын әдіс. Бұл агароза мен полиакриламидті гель электрофорезінің негізгі айырмашылығы. Сонымен қатар, агарозды гель электрофорезі ДНҚ мен РНҚ бөлу үшін қолданылады, ал полиакриламидті гель электрофорезі ДНҚ, РНҚ немесе ақуыздар сияқты нуклеин қышқылдарын бөлу үшін қолданылады.
Келесі кесте агароза мен полиакриламидті гель электрофорезі арасындағы айырмашылықты қорытындылайды.
Қорытынды – Агароза және полиакриламидті гель электрофорез
Агароза және полиакриламидті гельдік электрофорез – молекулалық биология зертханаларында қолданылатын гельдік электрофорез әдістерінің екі түрі. Агарозды гель электрофорезі биомолекулаларды бөлу үшін агароз гелін пайдаланады. Агароза әдетте адамдар үшін улы емес, ал полиакриламид адамдар үшін улы. Сонымен қатар, агарозды гель электрофорезі төмен ажыратымдылықты көрсетеді, ал полиакриламидті гель электрофорезі жоғарырақ ажыратымдылықты көрсетеді. Полиакриламидті гель электрофорезі биомолекулаларды бөлу үшін полиакриламидті гельді пайдаланады. Бұл агароза мен полиакриламидті гель электрофорезі арасындағы айырмашылықты қорытындылайды
