Негізгі айырмашылық – жинақтау гелі мен бөлгіш гель
Стектік гель және бөлу гелі терминдері SDS-PAGE техникасын түсіндіруде қолданылады. SDS-PAGE немесе натрий додецилсульфаты-полиакриламидті гель электрофорезі ақуыз молекулаларын олардың молекулалық салмағына қарай бөлу үшін қолданылатын зертханалық әдіс болып табылады. Техниканың артындағы теория әртүрлі молекулалық салмағы бар ақуыздар әртүрлі миграциялық жылдамдықтарды көрсетеді; төмен молекулалы молекулалар жылдамырақ, ал жоғары молекулалық масса баяу қоныс аударады. Миграция үшін орта гель болып табылады. Стектік гель және бөлу гелі деп аталатын гельдердің екі түрі бар. Стектеу гелі мен бөлу гелі арасындағы негізгі айырмашылық мынада: қабаттаушы гельдің рН мәні 6,8, ал бөлу гелінің рН мәні 8,8.
Стекинг гелі дегеніміз не?
Стекинг гелі - SDS-PAGE техникасында неғұрлым концентрлі еріткіш гельдің (бөлгіш гель) үстіне орналастырылған төмен концентрациялы полиакриламидті гель. Стектік гель электрофорездің ажыратымдылығын жақсарту үшін қолданылады. Ажыратымдылық үлгідегі белоктарға әсер ететін қабаттасқан гель мен еріткіш гель концентрациялары арасындағы айырмашылыққа байланысты артады. Стектік гельдегі полиакриламидтің концентрациясы төмен болғандықтан, кеуектер мөлшері жоғары. Бұл сонымен қатар бөлуді арттыруға көмектеседі.
Стектік гель - шамамен 7% полиакриламидтен тұратын үлкен тесіктері бар борпылдақ полиакриламидті гель. Бұл кеуектер үлкен ақуыз молекулалары үшін айтарлықтай тосқауыл ретінде әрекет етпейді. Демек, бұл гель белоктардың қозғалғыштығына аздап әсер етеді. Бұл ақуыздың қозғалғыштығы мен мөлшеріне қарай оларды екі гель арасында шоғырландыру арқылы бөлуді жасайды.
01-сурет: SDS-PAGE акриламидті гель
Стектік гельдің рН мәні 6,8. Оның рН 2 рН бірлігіне ерітілген гельге қарағанда қышқыл. Бұл рН төмен иондық күшті білдіреді, демек жоғары электрлік кедергі. Бұл гельдегі басқа зарядталған бөлшектерге қарағанда белоктардың қозғалғыштығын тудырады.
Бөлгіш гель дегеніміз не?
Бөлгіш гель немесе SDS-PAGEtechnique еріткіш гелі - төмен концентрациялы қабаттасуға арналған гельдің үстіне орналастырылған жоғары концентрациялы полиакриламидті гель. Бөлгіш гель құрамында көп мөлшерде полиакриламид (10%) бар. Бұл гельдің рН мәні рН=8,8 ретінде сақталады, бұл қабаттасатын гелге қарағанда жоғары рН деңгейі.
02-сурет: Гельдік электрофорез аппараты
Ақуыз молекулалары бөлетін гельге жеткенде, бұл молекулалардың миграциясы баяулайды, өйткені бөлгіш гель ақуыз молекулаларының қозғалысы үшін айтарлықтай кедергі бола алатын шағын кеуектері бар жоғары концентрациялы гель болып табылады.. Бұл баяулау басқа белоктардың баяу қозғалуына мүмкіндік береді, нәтижесінде екі гель арасында тар, шоғырланған жолақ пайда болады.
Гельді жинақтау мен бөлу гельінің арасындағы байланыс қандай?
Бір құрылғыда жинақтау гелі де, бөлу гелі де қолданылады
Гель мен бөлу гелінің айырмашылығы неде?
Стекинг гелі мен бөлгіш гель |
|
| Стектік гель – SDS-PAGE техникасында концентратталған еріткіш гельдің (бөлгіш гель) үстіне орналастырылған төмен концентрациялы полиакриламидті гель. | Бөлгіш гель немесе SDS-PAGE техникасының еріткіш гелі - төмен концентрациялы қабаттасуға арналған гельдің үстіне орналастырылған жоғары концентрациялы полиакриламидті гель. |
| Орналастыру | |
| Стектік гель еріткіш (бөлгіш) гельге қойылады. | Бөлгіш гель гельдік электрофорезге арналған контейнердің түбіне қойылады. |
| Концентрация | |
| Стектік гельдің концентрациясы жоғары. | Айырғыш гельдің концентрациясы төмен. |
| Полиакриламид мазмұны | |
| Стектік гель шамамен 7% полиакриламидті қамтиды. | Бөлгіш гельдің құрамында шамамен 10% полиакриламид бар. |
| pH | |
| Гельдің рН мәні 6,8. | Бөлгіш гельдің рН мәні 8,8. |
| Теуек өлшемі | |
| Стектік гельде үлкен кеуектер бар. | Бөлгіш гельде кішкене кеуектер бар. |
| Ажыратымдылық | |
| Стектеу гелі жақсырақ ажыратымдылық береді. | Бөлгіш гель нашар ажыратымдылық береді. |
Қорытынды – жинақтау гелі мен бөлгіш гель
Стектік гель және бөлу гелі - берілген үлгідегі ақуыз молекулаларының жақсырақ бөлінуін алу үшін қолданылатын полиакриламидті гельдердің екі түрі. Жинақтаушы гель мен бөлу гелінің айырмашылығы мынада: қабаттаушы гельдің рН мәні 6,8, ал бөлу гелінің рН мәні 8,8.
