Гельді фильтрациялау мен ұқсастық хроматографиясының негізгі айырмашылығы мынада: гельдік фильтрациялық хроматография талданатын зат үлгісінің молекулалық массасындағы немесе өлшеміндегі айырмашылықтарға байланысты, ал ұқсастық хроматографиясы талданатын заттың иммобилизацияланған лигандқа жақындығына байланысты.
Аналитикалық химиядағы хроматография термині әртүрлі әдістерді қолдана отырып қоспадағы компоненттерді бөлу процесін білдіреді. Хроматография - бөлудің әртүрлі әдістерінің әртүрлі санын білдіретін жалпы атау.
Гель фильтрациялық хроматография дегеніміз не?
Гельді сүзу хроматографиясы – компоненттердің бөлінуі молекулалық салмақ немесе өлшем айырмашылығына байланысты аналитикалық әдіс. Бұл әдіс өлшемді алып тастау хроматографиясы немесе молекулалық елеуіш хроматографиясы ретінде де белгілі. Бұл процестегі бөлу әдісі үлгідегі молекулалардың гель-сүзу ортасының тесіктеріне ену қабілетіне байланысты.
Гельді сүзу техникасында стационарлы фазада тар ауқымды қамтитын молекулалық өлшемді кеуектері бар гидратталған, губка тәрізді материалдың түйіршіктері бар. Осы «молекулярлық електер» бар колонка арқылы әртүрлі мөлшердегі молекулалардан тұратын сулы ерітіндіні өткізетін болсақ, сүзу ортасының кеуектерінен үлкенірек молекулалар колонна арқылы жылдам қозғалады. Керісінше, кішірек молекулалар гельдің тесіктеріне еніп, баған арқылы баяу қозғалады. Молекулалар молекулярлық өлшемдердің кішірейу ретімен бағаннан элюцияланады. Мұнда гельді алып тастау шегі - берілген гельдің тесіктеріне өте алмайтын ең кішкентай молекулалардың молекулалық массасы.
Гельді сүзу әдістерінің әртүрлі түрлері бар, мысалы, жанама гельді сүзу әдісі, тұрақты күйдегі гельді фильтрациялау, гель моншақ диализі және т.б. Жанама гельді фильтрация хроматографиясы қалқанша безінің бос гормондарын анықтауда пайдалы. Тұрақты күйдегі гельді фильтрация хроматографиясы негізінен кортизол, тестостерон және т.б. сияқты бос стероидтарды өлшеуге пайдалы жанама әдіс болып табылады. Екінші жағынан, гельді диализ - салыстырмалы түрде қарапайым тұрақты күйдегі гельді фильтрациялаудың модификациясы.
Афинитті хроматография дегеніміз не?
Афинділік хроматографиясы – иммобилизацияланған лиганд пен оның байланыстырушы серіктесі арасындағы белгілі бір байланыстыру әрекетіне байланысты аналитикалық әдіс және бөлу әдісі. Кейбір мысалдарға антидене-антигенді байланыстыру, фермент-субстратпен байланысу және фермент-ингибиторды байланыстыру жатады. Сондықтан бұл әдіс нуклеин қышқылын тазартуда, жасуша сығындыларынан ақуызды тазартуда және қаннан тазартуда көптеген маңызды қолданбаларға ие.
Бұл техникада ең маңызды қасиет лигандтарды иммобилизациялау болып табылады. Ол үшін акрилаттар мен силикагель сияқты әртүрлі материалдарды пайдалана аламыз. Мақсатты молекуланың лигандқа стерикалық интерференциясын болдырмау маңызды. Сонымен қатар, қатты фазаға ингибитор қосылады. Біз бұл ингибиторды аралық деп атаймыз. Классикалық түрде аралық элемент көмірсутек тізбегінен тұрады.
Афинділік хроматографиясының стационарлы фазасы өзек, аралық және лигандты қамтиды. Кейде оның лигандамен байланысқан металл ионы да болады. Бұл техникадағы стационарлық фаза үшін ең қолайлы қатты фаза агарозды гель болып табылады, себебі ол колонканы кез келген өлшемдегі шайыр төсектерімен толтыру және орау үшін оңай бөлінеді және биомолекулалардың моншақтарға еркін ағып кетуі үшін жеткілікті үлкен. Лигандалар моншақ полимеріне әртүрлі тәсілдермен ковалентті түрде қосыла алады. Ең көп таралған спрей қосылыстары цианоген бромиді, эпоксид, С6 қышқылымен эпоксид және диамин болып табылады. Екінші жағынан, біз пайдалана алатын лиганд мақсатқа сәйкес ерекшеленеді, мысалы, антидене-антиген, темір немесе алюминий иондары-фосфопротеиндер, авидин-биотин, глутатион-GST, хелатор-Оның белгіленген белоктары, т.б.
Гельді фильтрациялау мен жақындық хроматографиясының айырмашылығы неде?
Хроматография маңызды аналитикалық әдіс болып табылады. Гельді фильтрациялық хроматография және жақындық хроматографиясы хроматографияның екі маңызды нұсқасы болып табылады. Гельді фильтрация мен аффинді хроматография арасындағы негізгі айырмашылық мынада: гельді фильтрация хроматографиясы талданатын зат үлгісінің молекулалық салмағының немесе мөлшеріндегі айырмашылықтарға байланысты, ал ұқсастық хроматографиясы талданатын заттың иммобилизацияланған лигандқа жақындығына байланысты.
Қорытынды – Гельді фильтрация және жақындық хроматографиясы
Қолданылуына және талданатын зат үлгісінің сипатына қарай хроматографиялық әдістердің әртүрлі түрлері бар. Гельді фильтрациялау және ұқсастық хроматографиясы - техниканың екі түрі. Гельді фильтрация мен ұқсастық хроматографиясының арасындағы негізгі айырмашылық мынада: гельді фильтрация хроматографиясы талданатын зат үлгісінің молекулалық салмағы немесе өлшеміндегі айырмашылықтарға байланысты, ал ұқсастық хроматографиясы талданатын заттың иммобилизацияланған лигандқа жақындығына байланысты.
