Ашытқы бір гибридті және ашытқы екі гибридті арасындағы негізгі айырмашылық ашытқы бір гибридті ДНҚ-ақуыз әрекеттесуін талдауға арналған in vitro негізіндегі талдау, ал ашытқы екі гибридті ақуыз-ақуыз әрекеттесуін талдауға арналған in vitro негізіндегі талдау.
Жасуша молекулаларының өзара әрекеттесуін зерттеу ген экспрессиясына және ақуыз жолдарына қатысатын тану орындарын анықтауға көмектеседі. ДНҚ мен ақуыздың өзара әрекеттесуі ДНҚ модификациялары және транскрипциялық реттеу және т.б. сияқты жасушалық процестердің ажырамас бөлігі болып табылады. Екінші жағынан, ақуыз мен ақуыздың өзара әрекеттесуі репликация, транскрипция, трансляция және сигнал беру сияқты жасушалық процестерде маңызды рөл атқарады. Сондықтан әртүрлі талдаулар арқылы жасушалық молекулалардың өзара әрекеттесуін анықтау өте маңызды. Ашытқы бір гибридті және ашытқы екі гибридті ДНҚ-ақуыз және ақуыз-ақуыз әрекеттесулерін талдауға арналған in vitro негізіндегі екі талдау.
Бір ашытқы гибридті дегеніміз не?
Бір ашытқы гибридті (Y1H) жасушаішілік ДНҚ-ақуыз әрекеттесуін талдауға арналған in vitro негізіндегі талдау. Бұл әдісті алғаш рет 1993 жылы Ван мен Рид белгіледі. Содан бері ол биологиялық зерттеулерде үлкен күш көрсетті. Бұл талдауда екі негізгі құрамдас бар: ДНҚ жемі және ақуыз жемдері.
01-сурет: ашытқы бір гибридті
Рәсімде ДНҚ тізбегі (ДНҚ жемі) алдымен екі түрлі репортердің (HIS3, LacZ) жоғары ағынында клондалады. Бұл репортер конструкциялары ашытқы штаммының геномына біріктірілген. Транскрипциялық факторлар белокты олжа ретінде алынады. Транскрипциялық факторлар гибридті ақуыздарды жасау үшін ашытқы Gal4 транскрипциялық факторының транскрипциялық белсендіру доменімен (AD) біріктіріледі. Бұл гибридті ақуыз ашытқы штаммына енгізбес бұрын плазмидаға біріктірілген. Рекомбинантты плазмидті енгізгеннен кейін, транскрипциялық фактор ДНҚ фрагментімен әрекеттескенде, AD бөлігі репортер генінің экспрессиясын (HIS3 немесе LacZ) белсендіреді. Плазмидаларды секвенирлеу ДНҚ фрагментімен байланыса алатын транскрипциялық факторды анықтауға мүмкіндік береді. Жақында ауруды диагностикалау үшін ашытқы бір гибридті әдіс қолданылды. Сондықтан болашақта бұл талдау ғылыми зерттеулерде және медициналық емдеуде кеңінен қолданылатын болады.
Екінші гибридті ашытқы дегеніміз не?
Ашытқы екі гибридті (Y2H) жасушаішілік ақуыз мен ақуыздың өзара әрекеттесуін талдауға арналған in vitro негізіндегі талдау. Бұл әдісті алғашында 1989 жылы Стэнли Филдс пен Ок-Кю Сонг тапқан. Бұл әдіс ашытқының Gal4 транскрипция факторын пайдаланып ақуыз бен ақуыздың әрекеттесуін анықтайды.
02-сурет: Екі гибридті ашытқы
Бұл әдісте екі синтез (гибридтер) алдымен қызығушылық танытатын ақуыздарды пайдалана отырып құрастырылады: бір ақуызды ДНҚ байланыстыру доменімен (DBD) біріктіру және басқа ақуызды Gal4 транскрипция факторының активатор доменімен (AD) біріктіру арқылы. DBD-мен біріктірілген ақуыз жем ретінде белгілі, ал AD-мен біріктірілген ақуыз жем ретінде белгілі. Ашытқы штаммында жем мен жыртқыштың өзара әрекеттесуі кезінде DBD және AD репортер генінің жоғары ағынында функционалды Gal4 транскрипция факторын жасау үшін жақын жерге жеткізіледі. Функционалдық транскрипция факторы репортер генінің экспрессиясын белсендіреді. Сонымен қатар, бұл әдіс қазіргі уақытта сүтқоректілердің жасушаларындағы интегралды мембраналық ақуыздардың өзара әрекеттесуін тексеру үшін қолданылады.
Бір ашытқы гибридті және ашытқы екі гибридті арасындағы қандай ұқсастықтар бар?
- Ашытқы бір гибридті және ашытқы екі гибридті ДНҚ-ақуыз және ақуыз-ақуыз әрекеттесулерін талдауға арналған in vitro негізіндегі екі талдау.
- Бұл талдаулар ашытқы штаммдарын пайдаланады.
- Екі талдау да Gal4 транскрипция факторының белсендіру доменін (AD) пайдаланады.
- Олар өзара әрекеттесулерді анықтау үшін репортер генін (HIS3 немесе LacZ) өрнек пайдаланады.
- Олардың жемі мен жемі бар.
- Екі талдау да заманауи биологиялық зерттеулерде өте пайдалы.
Ашытқы бір гибридті және ашытқы екі гибридті арасындағы айырмашылық неде?
Бір ашытқы гибридті ДНҚ мен ақуыздың өзара әрекеттесуін талдауға арналған in vitro негізіндегі талдау, ал екі ашытқы гибридті ақуыз мен ақуыздың өзара әрекеттесуін талдауға арналған in vitro негізіндегі талдау. Осылайша, бұл ашытқы бір гибридті және ашытқы екі гибридті арасындағы негізгі айырмашылық. Сонымен қатар, бір гибридті ашытқыда жем - бұл ДНҚ фрагменті, ал жем - ақуыз молекуласы. Екінші жағынан, екі гибридті ашытқыда жем де, жем де ақуыз молекулалары болып табылады.
Төмендегі инфографика ашытқы бір гибридті және ашытқы екі гибридті қатар салыстыру үшін кестелік түрдегі айырмашылықтарды көрсетеді.
Қорытынды – ашытқы бір гибридті және ашытқы екі гибридті
Ашытқы бір гибридті және ашытқы екі гибридті in vitro негізіндегі екі маңызды талдау. Бір гибридті ашытқы ДНҚ мен ақуыздың өзара әрекеттесуін талдауға арналған in vitro негізіндегі талдау, ал ашытқы екі гибридті ақуыз мен ақуыздың өзара әрекеттесуін талдауға арналған in vitro негізіндегі талдау. Осылайша, бұл ашытқы бір гибридті және ашытқы екі гибридті арасындағы негізгі айырмашылық.
