Негізгі айырмашылық – Тікелей және жанама ELISA
Ферменттік иммундық талдау (ИФА), сондай-ақ ферментті иммундық талдау ретінде белгілі, қандағы антиденелерді анықтайтын серологиялық сынақ. Ол науқастың белгілі бір вирус түрімен немесе басқа жұқпалы агентпен (антиген) ұшырағанын және организмде инфекцияға қарсы антиденелердің пайда болғанын анықтау үшін диагностикалық құрал ретінде қолданылады. ELISA өткен және қазіргі инфекцияларды да анықтай алады. Демек, ELISA жиі ауруларды терең талдау алдында дәрігерлердің алдын ала скринингтік сынағы ретінде пайдаланылады. Бұл зерттеуді зертханада науқастан қан алу арқылы жасауға болады. ELISA тестінің екі түрі бар: тікелей ИФА және жанама ИФА. Тікелей және жанама ИФА арасындағы негізгі айырмашылық мынада: жанама ИФА сезімтал және қайталама антиденені қосуды қажет етеді, ал тікелей ИФА сезімталдығы азырақ және тек негізгі антиденені пайдаланады.
Тікелей ИФА дегеніміз не?
ИФА – қандағы белгілі бір антигендердің немесе антиденелердің бар-жоғын анықтау үшін орындалатын ауруды диагностикалық тексеру. Ол пластиналық талдау ретінде жасалады. Ол оңай талданатын ферменттермен байланысқан антиденелерді пайдаланады. Сарысу үлгісінде антигендердің болуы ферменттермен байланысқан арнайы антиденелермен байланысады. Соңғы кезеңде ферментпен әрекеттесу үшін арнайы субстрат қосылады. Фермент субстратты түсті немесе сигнал шығаратын өнімге айналдырады. Химиялық субстраттың түсінің өзгеруі сарысу үлгісінде белгілі бір антидененің болуын көрсетеді. Тікелей ELISA сынағы тек ферментпен байланысқан негізгі антиденені пайдаланады. Антигенмен байланысқаннан кейін ол тез түсін өзгертеді, бұл қанда инфекциялық агенттің болуын көрсетеді. Алайда, тікелей ELISA кезінде сигналдардың қарқындылығы әлсіз, өйткені эпитоптар антигендермен байланысумен шектеледі. Демек, тікелей ИФА жанама ИФА-мен салыстырғанда сезімтал емес.
01-сурет: тікелей ELISA сынағы
Жана емес ИФА дегеніміз не?
ИФА антиденелердің екі түрін пайдаланып орындалуы мүмкін, атап айтқанда; біріншілік антидене және екіншілік антидене. Жанама ELISA құралы жақсырақ анықтау үшін сигналдарды күшейту үшін антиденелердің екі түрін де пайдаланады. Жанама ELISA әдісі келесідей орындалады.
- Пластиналар антигендермен инкубацияланады және спецификалық емес байланысуды бөгеу үшін жуылады.
- Содан кейін бастапқы антиденелер қосылады және жуылады.
- Ферментпен байланысты екіншілік антидене қосылады және жуылады.
- Субстрат қосылады және ферменттермен әрекеттесуге рұқсат етіледі.
- Сигналдар анықталып, үлгідегі спецификалық антигеннің болуы немесе жоқтығы анықталады.
Жана емес ELISA сынағы кезінде бірнеше қайталама антиденелер бір бастапқы антиденемен байланыса алады. Екіншілік антиденелер оңай зерттелетін ферменттермен байланысады. Сондықтан, бір байланыстыру бірнеше өзара әрекеттесудің арқасында күшті сигнал жасай алады. Демек, жанама ELISA тікелей ИФА-ға қарағанда сезімтал. Дегенмен, жанама ИФА қайталама антиденелердің айқаспалы реакцияларына байланысты спецификалық емес сигналдар жасай алады.
02-сурет: жанама ELISA сынағы
Тікелей және жанама ИФА-ның айырмашылығы неде?
Тікелей және жанама ELISA |
|
| Тікелей ELISA жанама ELISA-мен салыстырғанда сезімталдығы төмен. | Жана емес ELISA сезімталырақ. |
| Алынған уақыт | |
| Тікелей ELISA сынағы – жылдам процесс. | Жана емес ELISA көп уақыт алады. |
| Антиденелерді пайдалану | |
| Тікелей ИФА-да антиденелердің тек бір түрі (Бастапқы антиденелер) қолданылады. | Біріншілік және қайталама антиденелер жанама ИФА үшін пайдаланылады. |
| Ферменттермен байланыс | |
| Біріншілік антиденелер ферменттермен байланысқан. | Екіншілік антиденелер ферменттермен байланысқан. |
| Екінші антиденелердің айқаспалы реактивтілігі | |
| Тікелей ИФА екінші антиденелердің айқаспалы реактивтілігін жояды. | Жана емес ELISA екінші антиденелердің айқаспалы реактивтілігіне әсер етеді. |
| Сигналдар | |
| Сигналдар жанама ИФА-мен салыстырғанда әлсіз. | Сигналдар жанама ИФА-да күшейтіледі. Сондықтан оны анықтау оңай. |
Қорытынды – Тікелей және жанама ELISA
ELISA – пациенттің қан үлгісінде антидене немесе антигеннің болуын анықтау үшін негізінен иммунологияда қолданылатын биохимиялық әдіс. Оны тікелей немесе жанама ИФА деп аталатын екі процесс арқылы орындауға болады. Тікелей ELISA сынағы антигенді анықтау үшін тек бастапқы антиденелерді пайдаланады, ал жанама ELISA бастапқы және қайталама антиденелерді пайдаланады. Тікелей ИФА-да бастапқы антиденелер таңбаланады, ал жанама ИФА-да екіншілік антиденелер таңбаланады. Бұл тікелей және жанама ELISA арасындағы айырмашылық.
