Бредфорд пен Лоури протеинінің талдауының негізгі айырмашылығы мынада: Брэдфорд протеин талдауы Coomassie тамаша көк G-250 бояғышының сіңіру ығысуына негізделген, ал Лоури протеинінің талдауы мыс иондарының (Cu+) иондарының реакциясына негізделген. пептидтік байланыстардың Фолин-Циокалтеу реагентімен тотығуы нәтижесінде түзіледі.
Талдау – үлгінің негізгі функционалдық құрамдастарын сипаттауға көмектесетін аналитикалық әдіс. Демек, талдау сапалық немесе сандық сынақ болуы мүмкін. Зертханалық медицина, фармакология, қоршаған орта биологиясы, молекулалық биология, биохимия және иммунология сияқты көптеген салалар мұндай талдауларды жүйелі түрде пайдаланады. Брэдфорд пен Лоури протеинінің талдауы - үлгі ерітіндісіндегі ақуыз концентрациясын анықтайтын екі биохимиялық талдау. Екі талдау да нәтижелерді беру үшін колориметриялық әдістерді пайдаланады.
Бредфорд протеиндік талдау дегеніміз не?
Брэдфорд протеин талдауы – ақуызды талдауға арналған жылдам спектроскопиялық аналитикалық процедура. Ол ерітіндідегі ақуыз концентрациясын өлшеу кезінде жоғары дәлдікті көрсетеді. Марион Брэдфорд бұл процедураны 1976 жылы енгізді. Бұл талдауда жалпы реакция өлшенген ақуыздардың аминқышқылдарының құрамына негізделген. Басқаша айтқанда, Брэдфорд ақуызының талдауы - колориметриялық талдау. Ол Coomassie brilliant blue бояуын пайдаланады. Демек, бұл колориметриялық ақуыз талдауы бояғыштың сіңіру ығысуына байланысты. Coomassie brilliant blue G-250 үш форматта бар: катиондық (қызыл), аниондық (көк) және бейтарап (жасыл). Қышқылдық жағдайында бояғыштың қызыл түрі көк түске айналады. Бұл ақуыздың байланысын растайды. Егер ақуыз болмаса, ерітінді қоңыр түсте қалуы мүмкін.
01-сурет: Брэдфорд ақуыз талдауы
Брэдфорд протеинінің талдауы басқа ақуыз талдауларынан ерекшеленеді, өйткені ол ақуыз ерітіндісінде бар әртүрлі химиялық қосылыстардың кедергілеріне азырақ сезімтал. Бұл қосылыстарға натрий, калий, глюкоза және сахароза, т.б. жатады.
Лоури протеинін талдау дегеніміз не?
Лоури протеинінің талдауы – ерітіндідегі ақуыздың жалпы деңгейін анықтау үшін қолданылатын биохимиялық талдау. Оливер Х. Лоури 1940 жылы осы реагентті жасаған адам. Процедура ерітіндідегі ақуыз концентрациясына пропорционал түсті өзгеруі арқылы ерітіндінің жалпы ақуыз концентрациясын көрсетеді. Демек, бұл да белоктың колориметриялық талдауы.
Пептидтік байланыстардың тотығуы нәтижесінде түзілетін мыс иондары (Cu+) мен Фолин-Циокалтеу реагентінің арасындағы реакция осы процедураның негізі болып табылады. Сондай-ақ, бұл реагент құрамында фосфомолибди қышқылы және фосфор-вольфрам қышқылы бар. Дегенмен, Лоури ақуызын талдаудың реакция механизмі жақсы түсінілмеген. Бірақ ол цистеин, триптофан және тирозин қалдықтарының Folin-Cioc alteu реагентінің тотықсыздануы арқылы тотығуын қамтиды.
02-сурет: Lowry ақуыз талдауы
Цистеин қалдықтары Лоури протеинінің талдауында байқалған абсорбцияға үлес қосады және реакция нәтижесінде тамаша көк молекула пайда болады; гетерополиялық молибден көк. Бұл молекуланың азаюы 660 нм-де сіңіру арқылы өлшенеді. Демек, Folin-Cioc alteu реагентін төмендететін цистеин мен триптофан қалдықтарының концентрациясы ерітіндідегі ақуыздың жалпы концентрациясын шығарады.
Бредфорд пен Лоури протеиндік талдауының қандай ұқсастықтары бар?
- Брэдфорд және Лоури ақуыз талдаулары ерітіндідегі ақуыз концентрациясын анықтайды.
- Екі әдіс те колориметриялық әдістер.
- Сонымен қатар екі әдістің де сезімталдығы жоғары.
Бредфорд пен Лоури протеин талдауының айырмашылығы неде?
Брэдфорд және Лоури протеин талдауы - ерітіндідегі ақуыз концентрациясын анықтайтын талдаудың екі түрі. Брэдфорд протеинінің талдауы Coomassie жарқыраған көк G-250 бояғышының сіңіру ығысуына негізделген, ал Лоури протеинінің талдауы пептидтік байланыстың тотығуы нәтижесінде пайда болған мыс иондарының Фолин-Циокалтеу реагентімен реакциясына байланысты. Сонымен, бұл Брэдфорд пен Лоури протеин талдауының негізгі айырмашылығы. Брэдфорд протеин талдауы нәтиже алу үшін 15 минутты алады, ал Lowery ақуыз талдауы нәтиже алу үшін 40-60 минутты алады. Осылайша, бұл Брэдфорд пен Лоури ақуыз талдауының тағы бір айырмашылығы. Сонымен қатар, Брэдфорд ақуызының талдауы аминқышқылдарының құрамына тәуелді, ал Лоури ақуызының талдауы ішінара аминқышқылдарының құрамына тәуелді. Демек, бұл Брэдфорд пен Лоури протеин талдауының арасындағы айырмашылық.
Төменде инфорафиялықта Брэдфорд пен Лоури ақуыз талдауының арасындағы айырмашылық туралы толығырақ мәліметтер берілген.
Қорытынды – Брэдфорд пен Лоури протеинін талдау
Талдау – үлгінің негізгі функционалдық құрамдас бөлігін сипаттау үшін пайдаланылатын аналитикалық әдіс. Брэдфорд және Лоури протеин талдауы - колориметриялық әдістермен жұмыс істейтін ақуызды талдаудың екі түрі. Брэдфорд пен Лоури протеинінің талдаулары ерітіндідегі ақуыз концентрациясын анықтайды. Дегенмен, Брэдфорд пен Лоури протеинін талдау арасындағы негізгі айырмашылық олар қолданатын колориметриялық әдіске байланысты. Брэдфорд протеин талдауы Coomassie жарқыраған көк G-250 пайдаланады, ал Лоури ақуыз талдауы мыс иондарын (Cu+) иондарын және Фолин-Циокалтеу реагентін пайдаланады. Сонымен қатар, Брэдфорд әдісі Лоури протеинін талдауға қарағанда жылдам нәтиже береді. Дегенмен, екі әдіс те өте сезімтал әдістер және әртүрлі заттардың кедергілеріне ұшырайды.
