Негізгі айырмашылық – көлденең және тік гельдік электрофорез
Гель электрофорезі – ДНҚ, РНҚ және басқа белоктар бар қоспаларды тиісті заряды мен молекулалық өлшеміне сәйкес бөлу үшін генетикада қолданылатын зертханалық әдіс. Бұл әдіспен бөлінуі қажет ДНҚ, РНҚ немесе белоктар кішкентай кеуектері бар гель арқылы өтеді. Молекулалар электр өрісі арқылы гель арқылы қозғалады. Молекулалар гельдің тесіктері арқылы өтеді, ал қозғалыс жылдамдығы олардың сәйкес ұзындығына кері пропорционалды. Сондықтан молекулалық мөлшері төмен молекулалар молекулалық массасы жоғары молекулаларға қарағанда жылдамырақ қозғалады. Электр өрісі гельдің екі шетіндегі зарядтардың айырмашылығынан туындайды. Бір ұшында оң заряд, ал екінші ұшында теріс заряд бар. ДНҚ және РНҚ молекулалары теріс зарядты болғандықтан, олар гельдің оң зарядталған ұшына қарай тартылады. Гельдік электрофорез екі түрлі болуы мүмкін: көлденең гельдік электрофорез және тік гель электрофорезі. Көлденең гельдік электрофорезде гель көлденең бағытта болады және гельдік қораптың өзінде болатын үздіксіз жұмыс істейтін буферге батырылады. Тік гельдік электрофорезде буферлік жүйе тігінен бағытталған және жоғарғы және төменгі жағында сәйкесінше катод пен анод бар екі камерасы бар үзіліссіз. Бұл көлденең және тік гель электрофорезінің негізгі айырмашылығы.
Көлденең гельдік электрофорез дегеніміз не?
Көлденең гельдік электрофорез ДНҚ, РНҚ немесе ақуыз молекулаларын олардың сәйкес молекулалық өлшемі мен зарядына сәйкес бөлудің негізгі теориясын пайдаланады. Бұл техникада гель көлденең бағытта болады және үздіксіз буферге батырылады. Агарозды гель гель қорабын екі бөлікке бөлу үшін қолданылады. Гель қорапшасының бір ұшында анод, ал екінші ұшында катод бар. Ток қолданылған кезде, осы техникада қолданылатын буфер заряд градиентін жасауға мүмкіндік береді. Зарядты қолданған кезде гель қызып кетеді. Буфер сонымен қатар температураны оңтайлы деңгейде ұстап тұратын салқындатқыш ретінде қызмет етеді. Жұмыс істеп тұрған буфердің рециркуляциясы рН градиентінің пайда болуына жол бермейді. Көлденең гельдік электрофорезде үзіліссіз буферлік жүйені пайдалану мүмкін емес, өйткені гель жүйесінің екі бөлімі жұмыс істейтін буфермен қосылады. Акриламид гель электрофорезі кезінде ақуыз қоспаларын бөлу үшін қолданылады.
01-сурет: Көлденең гельдік электрофорез
Көлденең гельдік электрофорезде акриламидті пайдалану мүмкін емес, өйткені гель қорабы оттегіге әсер етеді. Оттегінің болуына байланысты акриламидтің полимерленуі тежеледі және бұл гельдің түзілуіне кедергі келтіреді. Көлденең гельдік электрофорез – ДНҚ мен РНҚ-ны бөлуде қолданылатын оңай әдіс.
Вертикаль гельдік электрофорез дегеніміз не?
Вертикаль гель электрофорезі әдісі гельдік электрофорездің бастапқы теориясына сәйкес жұмыс істейді, бірақ ол көлденең гельдік электрофорез әдісіне қарағанда күрделірек болып саналады. Бұл әдіс үзіліссіз буферді пайдаланады. Жоғарғы камерада катод, ал төменгі камерада анод орналасқан. Әрбір бөлімде бар электродтар қажетті электр өрісін қамтамасыз етеді. Бекітілген екі шыны пластинаның арасына жұқа гель қабаты құйылады. Сондықтан гельдің жоғарғы бөлігі үстіңгі камераға, ал төменгі бөлігі төменгі жағындағы камераға батырылады. Ток қолданылғаннан кейін буфердің кішкене бөлігі гель арқылы жоғарғы камерадан төменгі камераға жылжиды. Бұл техникада қолданылатын ток минуттық бірліктерге тең.
02-сурет: тік гельдік электрофорез
Тік гельдік электрофорезде буфер тек гель арқылы өтеді. Бұл бөлу сатысында кернеу градиентін дәл басқаруға мүмкіндік береді. Акриламидті гельді қолдануға болады, өйткені бөлімдер атмосфералық оттегінің әсеріне ұшырамайды. Акриламидті гельдің тесік өлшемі кішірек болғандықтан, жоғары ажыратымдылықпен дәл бөлуге болады.
Көлденең және тік гельдік электрофорездің қандай ұқсастықтары бар?
- Екі жүйе де гельдік электрофорездің негізгі теориясына сәйкес жұмыс істейді.
- Анод пен катод екі жүйеде де қажетті электр өрісін қамтамасыз ету үшін пайдаланылады.
Көлденең және тік гельдік электрофорездің айырмашылығы неде?
Көлденең және тік гельдік электрофорез |
|
| Көлденең гельдік электрофорез – гель көлденең бағытта болатын гельдік электрофорез әдісі. | Вертикаль гель электрофорезі – гель тігінен бағытталған гельдік электрофорез әдісі. |
| Буфер | |
| Көлденең гельдік электрофорез үздіксіз буферден тұрады. | Тік гельдік электрофорезде жұмыс істейтін буфер үзіліссіз. |
| Акриламидті қолдану | |
| Акриламидті көлденең гельдік электрофорез үшін пайдалану мүмкін емес, өйткені гель қорабы атмосфералық оттегінің әсеріне ұшырайды. | Гель екі бөлек камераның арқасында атмосфералық оттегіге әсер етпейтіндіктен, акриламидті гельдік тік электрофорез үшін пайдалануға болады. |
| Функция | |
| Көлденең гельдік электрофорез көбінесе ДНҚ және РНҚ қоспаларын бөлу үшін қолданылады, бірақ ақуыздарды емес. | Вертикаль гельдік электрофорез белок қоспаларын бөлу үшін қолданылады. |
Қорытынды – Көлденең және тік гельдік электрофорез
Гель электрофорезі – ДНҚ, РНҚ және белоктар молекулалары бар қоспаларды бөлуде кеңінен қолданылатын зертханалық әдіс. Гельдік электрофорездің екі әдісі бар: көлденең және тік гельдік электрофорез. Көлденең гельдік электрофорезде жұмыс істейтін буфер үздіксіз, ал тік гельдік электрофорезде үзіліссіз болады. Бұл көлденең және тік гельдік электрофорездің айырмашылығы. Екі жүйе де гельдік электрофорездің ортақ принципіне сәйкес жұмыс істейді.
Көлденең және тік гельдік электрофорездің PDF нұсқасын жүктеп алу
Сіз осы мақаланың PDF нұсқасын жүктеп алып, сілтеме жазбасына сәйкес офлайн мақсаттарда пайдалана аласыз. PDF нұсқасын мына жерден жүктеп алыңыз: Көлденең және тік гельдік электрофорез арасындағы айырмашылық.
