Негізгі айырмашылық – SDS беті мен Western Blot
Western blotting - ақуыз үлгісінен белгілі бір ақуызды анықтайтын әдіс. Бұл әдіс бірнеше негізгі қадамдар арқылы орындалады: гельдік электрофорез, тазарту және будандастыру. Натрий додецил сульфаты полиакриламидті гель электрофорезі (SDS Page) – белоктарды өлшемдеріне (молекулярлық салмағы) сәйкес бөлу үшін қолданылатын гельдік электрофорез әдісінің бір түрі. Western blot - бұл SDS бетіндегі ақуыздардың бірдей үлгісін тасымалдау үшін қолданылатын тазарту мембранасының арнайы парағы. SDS Page пен western blot арасындағы негізгі айырмашылық SDS Page қоспадағы ақуыздарды бөлуге мүмкіндік береді, ал western blot қоспадан белгілі бір ақуызды анықтауға және сандық анықтауға мүмкіндік береді. Екеуі де ақуызды талдау зерттеулерінде пайдалы.
SDS беті дегеніміз не?
SDS Page - ақуызды бөлу үшін қолданылатын гельдік электрофорез әдісі. Ол әдетте биохимияда, генетикада, сот сараптамасында және молекулалық биологияда қолданылады. Белоктар үлгіден алынғаннан кейін, олар SDS және полиакриламидтен тұратын гельде жұмыс істейді. SDS - белоктарды сызықтық (денатураттау белоктар) және олардың молекулалық массасына пропорционал сызықты ақуыздарға теріс заряд беру үшін қолданылатын анионды жуғыш зат. Полиакриламид гель үшін қатты тірекке айналады. Теріс зарядталған денатуратталған ақуыздар гель арқылы аппараттың оң жақ шетіне қарай жылжиды. Белоктардың өлшемдеріне сәйкес, миграция жылдамдығы белоктар арасында әр түрлі болады және бөліну жүреді. Сондықтан SDS беті жеке белоктарды өлшемдеріне қарай бөлу үшін пайдалы.
Белоктарды фракциялау үшін полиакриламидті гельді дайындау SDS бетіндегі шешуші қадам болып табылады. Полиакриламидтің дұрыс концентрациясы және қолданылатын кросс-байланыстырушы агент түрі гельдің физикалық қасиеттеріне қатты әсер етеді, бұл әртүрлі ақуыздардың нақты бөлінуін қамтамасыз етеді. Гельдің кеуектерінің өлшемдерін тиімді бөлу үшін дұрыс басқару керек. Дегенмен, SDS беті жоғары ажыратымдылықтағы ақуызды бөлу әдісі ретінде қарастырылады.
SDS Page техникасында ақуызды талдауда үлкен шектеулер бар. SDS бөліну алдында ақуыздарды денатурациялайтындықтан, ол ферментативті белсенділікті, ақуыздармен байланысуын, ақуыз кофакторларын және т.б. анықтауға мүмкіндік бермейді.
01-сурет: SDS беті
Western Blot дегеніміз не?
Western blotting әдісі ақуыз қоспасынан белгілі бір ақуызды анықтауға және ақуыздың мөлшері мен молекулалық салмағын өлшеуге мүмкіндік береді. Western blot - бұл SDS-полиакриламидті гельдегі ақуыз үлгілерінің айна бейнесін алу үшін бояу процедурасы кезінде қолданылатын мембрана. Вестернді тазарту үшін қолданылатын мембрана негізінен нитроцеллюлозадан немесе поливинилидендифторидтен (PVDF) тұрады. Тасымалданған ақуызы бар мембрананы қажетті ақуызды анықтау үшін пайдалануға болады. Гибридизация арқылы қажетті ақуызды анықтау үшін жоғары сапалы антидене қажет. Антидене өзінің спецификалық антигенімен байланысады және ақуыз болып табылатын қажетті антигеннің болуын анықтайды.
Белоктарды SDS полиакриламидті гелінен вестерн блотқа тасымалдау электроблоттау арқылы жүзеге асырылады. Бұл белоктардың гельден электрофорезге ұшырап, нитроцеллюлоза мембранасына (western blot) өтуіне әкелетін тиімді және жылдам әдіс.
02-сурет: Western Blot
SDS Page пен Western Blot арасындағы айырмашылық неде?
SDS беті және Western Blot |
|
| SDS беті гельдік электрофорез әдісі болып табылады. | Western blot – қоспадағы белгілі бір ақуызды анықтау үшін мембранада орындалатын әдіс. |
| Қолдану | |
| SDS беті белоктарды өлшемдеріне қарай бөлуге мүмкіндік береді. | Western blot SDS бетіндегі гельдегі белоктарды оның үлгісін өзгертпестен тасымалдауға және арнайы антиденелермен будандастыруға мүмкіндік береді. |
| Кемшіліктер | |
| Белоктың денатурациясы, жоғары құны және нейротоксиндік химиялық заттардың болуы - бұл техниканың кемшіліктері. | Бұл әдіс көп уақытты қажет етеді және жақсы тәжірибелі жеке және арнайы бақыланатын шарттарды қажет етеді. |
Қорытынды – SDS беті және Western Blot
SDS беті және вестерн-блот - ақуызды талдауға қатысатын екі әдіс. SDS беті белоктарды молекулалық салмағына сәйкес гельде оңай бөлуге мүмкіндік береді. Вестерн блот арнайы антиденелермен будандастыру арқылы белгілі бір ақуыздың болуын және санын растауға көмектеседі. Бұл SDS беті мен western blot арасындағы айырмашылық.
