Негізгі айырмашылық – жылы және суық трипсинация
Жылы және суық трипсинизация - жануарлар жасушаларын өсіруде жасушаларды ферментативті дезагрегациялауда қолданылатын екі әдіс. Жылы және суық трипсинация арасындағы негізгі айырмашылық, атаулар көрсеткендей, жасушалық дезагрегация үшін трипсин қосылатын температураға байланысты. Жылы трипсинизация жоғары температура жағдайында (36,5 – 37 0C), ал суық трипсинизация төмен температура жағдайында орын алады.
Жануарлар жасушаларын бастапқы жасуша өсіру процесінде үш негізгі әдіс қолданылады және олар сәтті болды. Үш әдіске жасушаларды механикалық дезагрегациялау, жасушаларды ферментативті дезагрегациялау және бастапқы экспланттау техникасы кіреді. Жасушалардың оқшаулануына әкелетін жасушалардың ферментативті ыдырауы және ол ақуызды ыдырататын фермент трипсин арқылы жүзеге асырылады. Сондықтан бұл процесс трипсинация деп аталады. Трипсинацияны екі түрлі жағдайда орындауға болады, атап айтқанда, жылы трипсинация және суық трипсинация. Жылы трипсинизация - бұл 36,5 – 37 0C температурада жылы жағдайларда жасушаларды трипсинмен өңдеу әдісі. Суық трипсинизация - бұл өте төмен температураны сақтайтын мұзда суық жағдайда орындалатын трипсинді өңдеу процесі.
Жылы трипсинация дегеніміз не?
Трипсинацияны жасушалық құрамдастарды ажырату үшін, бастапқы жасуша мәдениетін шығару үшін жасушаларды оқшаулау үшін жасауға болады. Трипсин - ақуызды ыдырататын фермент және трипсинизацияда қолданылатын фермент қоспасы шикі сығынды немесе тазартылған өнім болуы мүмкін. Шикі сығынды ақуыз лизисі мен жасушаның ыдырауында тиімдірек деп айтылады, өйткені оның құрамында басқа деградациялық ферменттер бар.
Жылы трипсинизация - жоғары температура жағдайында орын алатын жасуша дезагрегациясының ең жиі қолданылатын ферментативті әдісі. Трипсинация әдісімен өңдеуден бұрын қажетті тін кішірек бөліктерге кесіледі. Бұл оңай бөлшектеу процесін жеңілдетеді. Содан кейін туралған тіндерді диссекциялық негізгі тұз ортасы деп аталатын арнайы құралда жуады.
Жуу кезеңі аяқталғаннан кейін жасушалар белсенді ферменті бар колбаға айналады, ол трипсин. Бұл әдіс жылы трипсинизация протоколын білдіретіндіктен, трипсин шамамен 37 0C температурада шамамен төрт сағат бойы орналастырылады.
01-сурет: трипсин
Мазмұны хаттаманы орындауды жеңілдету және бөлшектеу процесін жылдамдату үшін центрифугалау әдістерін қолдану арқылы араласады және араластырылады. Ұсынылған уақытқа жеткеннен кейін жасушаларды үстіңгі қабаттан алуға болады. Содан кейін үстіңгі қабаттан алынған жасушалар белгілі бір температура мен уақытта инкубацияланады.
Суық трипсинация дегеніміз не?
Суық трипсинация - суық жағдайда болатын трипсинацияның басқа түрі. Бұл техникада ұсақталған және жуылған жасушалар мұздағы флакондарға салынып, содан кейін трипсинмен сіңдіріледі. Жібіту мерзімі әлдеқайда ұзағырақ – шамамен 6 – 24 сағат.
Жібіту процедурасы аяқталғаннан кейін трипсин жасуша лизатынан шығарылады және тін бөліктері 37 0C температурада шамамен 20 – 30 минут бойы инкубацияланады. Жасушалардың дезагрегациясы тіндік қоспаны қайталап тамшуырлау арқылы жүзеге асады. Бұл жасушалардың мембранадан диссоциациялануына және үстіңгі қабатқа келуіне мүмкіндік береді. Жасушалар супернатантта болғаннан кейін олар инкубацияланады және қажетті температура мен уақыт кезеңінде өсіріледі.
Суық трипсинация әдісінің бірнеше артықшылығы бар
- Тіршілікке қабілетті жасушалардың жоғары шығымдылығы, өйткені жасуша зақымдануы барынша азайтылады. Центрифугалау қадамдарын қолданбау арқылы жасушаның зақымдануы азайтылады.
- Өте ыңғайлы әдіс.
- Аз еңбек.
Суық трипсинация әдісінің негізгі шектеуі - үлкен мөлшерлерді бір данада пайдалану мүмкін емес.
Жылы және суық трипсинацияның қандай ұқсастықтары бар?
- Жылы және суық трипсинизация процестері жасушаларды дезагрегациялау үшін трипсин ферментін пайдаланады.
- Жылы және суық трипсинизация процестері жасушаларды дезагрегациялау үшін жасуша мәдениеті процедураларында қолданылады.
- Жылы және суық трипсинация процедураларының екеуінде де жасушалар үстіңгі қабаттан алынады.
Жылы және суық трипсинацияның айырмашылығы неде?
Жылы және суық трипсинация |
|
| Жылы трипсинизация - бұл 36,5 – 37 температурада жылы жағдайларда жасушаларды трипсинмен өңдеу 0. | Суық трипсинизация - бұл өте төмен температураны сақтай отырып, жақсырақ мұзда, суық жағдайда орындалатын трипсинді өңдеу процесі. |
| Протокол | |
| Ұсақталған ұлпа бөліктері процедура бойы үздіксіз 37 0C температурада сақталады. | Ұсақталған тін бөліктері алдымен мұздай салқын температурада сақталады, содан кейін 37 0 температурада сақталады. |
| Температура | |
| Жылы трипсинация 36,5 – 37 кезінде орын алады 0 | Суық трипсинизация мұзды салқын температурада жүреді. |
| Тұтынылатын уақыт | |
| Жылы трипсинацияның бүкіл процесі (шамамен 4 сағат) үшін аз уақыт қажет. | Суық трипсинация үшін ұзағырақ уақыт қажет (шамамен 6 – 24 сағат). |
| Тіршілікке қабілетті жасушалардың шығымы | |
| Жылы трипсинация деңгейі төмен. | Суық трипсинация деңгейі жоғары. |
| Центрифугалауды пайдалану | |
| Жасушаларды жылы трипсинизациялауда дезагрегациялау үшін центрифугалау қажет. | Суық трипсинацияда центрифугалау қажет емес. |
| Трипсинацияға арналған тіннің бастапқы мөлшері | |
| Ұлпаның көп мөлшерін жылы трипсинацияда пайдалануға болады. | Суық трипсинацияда тіннің азырақ мөлшерін пайдалануға болады. |
| Жасуша зақымдануы | |
| Жылы трипсинацияда центрифугалаудың арқасында жоғары. | Суық трипсинацияға байланысты азырақ. |
Қорытынды – жылы және суық трипсинация
Трипсинизация – жасуша өсіру процесі кезінде бастапқы жасуша дақылдарын бөлшектеу және дайындау үшін ақуызды ыдырататын трипсин ферментін пайдалану әдісі. Процедура барысында қолданылатын температураларға негізделген трипсинацияның екі негізгі әдісі бар. Олар жылы және суық трипсинация. Жылы трипсинизация 37 0C температурада жүзеге асырылады, ал суық трипсинизация мұздай салқын жағдайларда жүзеге асырылады. Суық трипсинацияның аяқталуы ұзағырақ уақытты қажет еткенімен, оның өміршең жасушаларының жоғары шығымдылығы айтылады. Бұл күшті центрифугалау қадамдарын қолданбайтындықтан, суық трипсинацияда жасуша зақымдануы барынша азайтылады. Бұл жылы және суық трипсинацияның айырмашылығы.
