Негізгі айырмашылық – нитроцеллюлоза мен нейлон мембранасы
Блотинг молекулалық биологиядағы ДНҚ, РНҚ және белоктардың олардың қоспаларынан нақты тізбектерін анықтаудың маңызды әдісі болып табылады. Ол блот деп аталатын мембрана арқылы жасалады. Солтүстік, оңтүстік және батыс бояу сияқты әр түрлі бояу әдістері бар. Арнайы емес байланыстыруды және қате анықтауды болдырмау үшін тазарту процесі үшін тиісті мембрананы таңдау мұқият жасалуы керек. Нитроцеллюлоза, нейлон және PVDF - бұл тазалау әдістерінде жиі қолданылатын мембраналар. Олардың әртүрлі сипаттамалары бар. Нитроцеллюлоза мен нейлон мембранасының негізгі айырмашылығы - нитроцеллюлоза мембраналарында ақуыздың жоғары иммобилизациялық потенциалы бар, ал нейлон мембраналарында нуклеин қышқылының жоғары иммобилизациялық потенциалы бар. Дегенмен, мембраналардың екі түрі де бояу техникасында жиі қолданылады.
Нитроцеллюлоза мембранасы дегеніміз не?
Нитроцеллюлоза мембранасы – нуклеин қышқылы мен ақуызды тазарту техникасында жиі қолданылатын мембраналық сүзгі. Оның ақуызды байланыстыру мүмкіндігі жоғары. Демек, нитроцеллюлоза мембраналары вестерн блтинг техникасында кеңінен қолданылады. Нитроцеллюлоза мембраналары будандастырудың барлық әдістерімен үйлесімді және кедергісіз жоғары байланыстыру қабілетін көрсетеді. Нитроцеллюлоза мембраналары табиғи түрде гидрофильді. Олар молекулалармен гидрофильді әрекеттеседі және оларды мембранаға тиімді түрде иммобилизациялайды. Коммерциялық нитроцеллюлоза мембраналары екі кеуек өлшемінде қол жетімді: 0,45 және 0,2 мкм.
01-сурет: western blotting үшін қолданылатын нитроцеллюлоза мембранасы
Нейлон мембранасы дегеніміз не?
Нейлон мембранасы - бұл тазалау техникасында қолданылатын коммерциялық мембрананың басқа түрі. Ол оңтүстік және солтүстік дақтарды нитроцеллюлоза мембраналарымен балама түрде қолданады. Нейлонды мембраналар ДНҚ-мен байланысуға жоғары жақындығына байланысты нитроцеллюлозаға қарағанда оңтүстікке арналған бояу үшін өте қолайлы. Нейлон мембраналарының бірнеше бірегей ерекшеліктеріне байланысты, зерттеушілер нитроцеллюлоза мембранасының орнына оңтүстік және солтүстік бояу үшін нейлон мембраналарын жиі пайдаланады. Нейлон мембраналары нитроцеллюлозадан айырмашылығы, аршу және қайта тексеру үшін де ұсынылады.
02-сурет: оңтүстік бояу үшін нейлон мембранасы қолданылады
Нитроцеллюлоза мен нейлон мембранасының айырмашылығы неде?
Нитроцеллюлоза және нейлон мембранасы |
|
| Нитроцеллюлоза мембраналары сынғыш. | Нейлон мембраналар сынғыш емес. |
| Өндеу | |
| Оларды өңдеу қиын. | Оларды өңдеу оңай. |
| Ескерту | |
| Қолдау көрсетілмейтін нитроцеллюлоза мембраналарын тексеру қиын. | Нейлон қабықшаларымен оқтау оңай. |
| Әртүрлі сақтау шарттарымен үйлесімділік | |
| Нитроцеллюлоза мембраналарының әртүрлі сақтау жағдайларына төтеп беру үшін беріктігі аз. | Нейлон мембраналары әртүрлі сақтау шарттарына сенімдірек жауап береді. |
| Қолдану | |
| Алдын ала сулау қажет. | Нейлон мембраналар үшін алдын ала сулау қажет емес. |
| Гидрофильді табиғат | |
| Нитроцеллюлоза мембраналары табиғаты бойынша гидрофильді, бірақ нейлон мембраналарына қарағанда гидрофильділігі төмен. | Олардың табиғаты жоғары гидрофильді. |
| Иммобилизация потенциалы | |
| Нитроцеллюлоза мембраналарының нуклеин қышқылдарына жақындығы аз. Бірақ оның ақуыздарға жақындығы жоғары. | Нейлон мембраналарының нитроцеллюлоза мембраналарына қарағанда нуклеин қышқылдарымен байланысу мүмкіндігі жоғары. |
Қорытынды – нитроцеллюлоза және нейлон мембранасы
Нитроцеллюлоза және нейлон мембраналар гельдегі жолақ үлгісін шығару үшін сүрту техникасында қолданылатын арнайы парақтар. Олар мембранада иммобилизациялау арқылы қоспалардан белгілі бір тізбекті немесе ақуызды анықтау мүмкіндігін береді. Молекулалар мембранада иммобилизацияланғаннан кейін оны таңбаланған зондтармен будандастыруды талдау үшін субстрат ретінде пайдалануға болады. Нитроцеллюлоза мембранасы ақуыздармен жоғары байланысуы себебінен вестерн блоттинг техникасында ақуызды анықтау үшін жиі қолданылады. Нейлон қабықшалары көбінесе оңтүстік және солтүстік былғары үшін қолданылады. Бұл нитроцеллюлоза мен нейлон мембранасының арасындағы айырмашылық.
