Негізгі айырмашылық – клондау және қосалқы клондау
Клондау және субклондау – қызығушылық тудыратын ДНҚ немесе гені бар генетикалық бірдей жасушаларды немесе ағзаларды жасайтын молекулалық биологиялық процедуралар. Клондау - бұл қызықты генді немесе ДНҚ-ны векторға енгізуді, оны қабылдаушы бактерия ішінде репликациялауды және генетикалық құрылымның дәл көшірмелері болып табылатын жасушаларды немесе ағзаларды өндіруді қамтитын әдіс. Субклондау - бұл векторға енгізілген қызығушылық генін екіншілік векторға енгізуді, оны қабылдаушы бактерия ішінде репликациялауды және жасушалардың немесе ағзалардың генетикалық бірдей көшірмелерін өндіруді қамтитын әдіс. Клондау мен субклондау арасындағы негізгі айырмашылық мынада: клондау кезінде қызығушылық тудыратын ген векторға байланған соң клондау процесін жалғастырады, ал субклондау кезінде қызығушылықтың клондалған гені ата-аналық вектордан бөлініп, қайтадан енгізіледі. алушы векторы және процесті жалғастырыңыз.
Клондау дегеніміз не?
Клондау – генетикалық жағынан бірдей ағзаларды немесе жасушаларды шығаратын процедура. Табиғатта клондау жыныссыз көбею жолында жүреді. Генетикалық рекомбинация немесе өзгеріс болмаса, еншілес жасушалар ата-анасының генетикалық құрылымын алады. Прокариоттық және эукариоттық организмдер екілік бөліну, бүршіктену, митоз және т.б. арқылы клондар жасайды. Молекулярлық биологияда гендерді немесе ДНҚ-ның арнайы фрагменттерін клондау - бұл нақты ДНҚ бөлімінің құрылымы мен қызметін зерттеудің танымал әдісі.
Молекулярлық клондаудың негізгі мақсаты – қызығушылық тудыратын ДНҚ фрагменті (негізінен гендер) бар генетикалық ұқсас жасушалардың немесе ағзалардың миллиондаған көшірмелерін жасау. Ол басқасының нақты генетикалық көшірмелері бар ағзаларды жасайды. Ең алдымен, құрылымдық және функционалдық ақпаратты алу және ДНҚ секвенциясы үшін молекулалық зерттеулерде арнайы гендер клондалады. Сондай-ақ, белгілі бір ақуыздарды немесе өнімдерді үлкен көлемде өндіру үшін клондау кеңінен қолданылады.
Клондау процедурасы
Клондау процедурасының негізгі қадамдары төмендегідей.
- Қызығушылық генін анықтау және оқшаулау. (ПТР арқылы қызығушылық генін күшейту).
- Қызықты геннің ас қорытуын шектеу (Рестрикциялық эндонуклеаза генді кесіп тастайды).
- Векторлық ДНҚ қорытылуын шектеу. (Векторлық ДНҚ да дәл осындай шектеу эндонуклеазасы арқылы кесіледі).
- Генді векторға енгізу және рекомбинантты молекуланың түзілуі.
- Рекомбинантты вектордың иесі бактерияға айналуы.
- Трансформацияланған бактерияларды оқшаулау және идентификациялау (плазмидтік векторда таңдалатын ген болуы керек, көбінесе трансформацияланған бактерияларды скринингке қарсы антибиотикке төзімділік гені).
- Хост ішіндегі рекомбинантты ген экспрессиясы.
01-сурет: клондау процедурасы
Субклондау дегеніміз не?
Субклондау – геннің қажетті функционалдығын алу үшін геннің экспрессиясын көру үшін қызығушылық тудыратын генді бір вектордан басқа векторға жылжыту процедурасы. Бұл әдіске екі вектор қатысады; атап айтқанда, негізгі вектор және тағайындалған вектор. Клондалған кірістірулер қосалқы клондау кезінде екінші векторға қайтадан жылжытылады. Генді бірінші вектордан екінші векторға көшіру мақсаты бірінші вектор жасай алмайтын нәрсені алу немесе ДНҚ-ның әлдеқашан клондалған фрагментінің ішінде генді қайтадан бөліп алып, оны жалғыз экспрессиялау болып табылады. Бұл процедурада басында шектеу ферменттері қолданылады.
Қосымша клондау процедурасы
Қосымша клондаудың негізгі қадамдары төмендегідей.
- Рестрикциялық эндонуклеазалардың көмегімен донорлық плазмидада (ата-аналық вектор) қызығушылық ДНҚ-ның бөлінуі.
- Қызықты ДНҚ-ны ПТР көмегімен күшейту.
- ПТР өнімін (қызықты ДНҚ) гельдік электрофорез арқылы тазарту.
- Негізгі плазмидада қызығушылық тудыратын ДНҚ-ны бөлу үшін пайдаланылатын бірдей шектеуші эндонуклеазалар арқылы реципиент плазмидасының ашылуы.
- Қызықты ДНҚ-ны (ген) реципиент плазмидасына субклондалған плазмиданы жасау үшін байлау.
- Қосымша клондалған вектордың құзыретті иесі бактерияға айналуы.
- Трансформацияланған жасушаларды тексеру.
- Плазмидті ДНҚ-ны тазарту және қажетті өнімдерді алу үшін ДНҚ секвенциясы немесе гендердің экспрессиясы үшін пайдалану.
Субклондау гендердің клондалған тобынан бір генді оқшаулау кезінде немесе қызықтыратын геннің нақты қызметін көру үшін қызықты ген пайдалы плазмидаға көшу қажет болғанда жүзеге асырылады.
02-сурет: қосалқы клондау процедурасы
Клондау мен қосалқы клондау арасындағы айырмашылық неде?
Клондау және қосалқы клондау |
|
| Клондау – генетикалық жағынан бірдей организмдерді немесе жасушаларды шығаратын процедура. | Қосымша клондау – геннің қажетті функционалдығын алу үшін геннің экспрессиясын көру үшін қызықты генді бір вектордан екінші векторға жылжыту процедурасы. |
| Процесс | |
| Қызықтыратын ДНҚ-ны ағзадан бөліп, векторға бір рет енгізіп, клондаңыз | Клондалған ДНҚ бірінші вектордан бөлініп, екінші векторға енгізіледі және клондалады. |
| Векторлар арқылы қозғалыс енгізу | |
| Енгізулерді (қызықты ДНҚ) бір вектордан екінші векторға жылжытпайды. | Енгізулерді негізгі вектордан тағайындалған векторға жылжытыңыз. |
Қорытынды – Клондау және қосалқы клондау
Клондау қызықтыратын гені немесе ДНҚ енгізілген генетикалық жағынан бірдей жасушаларды немесе ағзаларды жасайды. Ол қызықты ДНҚ-ны векторға және қабылдаушы бактериядағы экспрессияға бөлу және енгізу арқылы жүреді. Субклондау клондаумен ұқсас қадамдарды бөліседі. Дегенмен, субклондау кезінде қазірдің өзінде клондалған ДНҚ фрагменті (қызықты ген) векторға енгізіледі және хост бактерияға айналады. Бұл клондау мен қосалқы клондау арасындағы негізгі айырмашылық.
