BL21 мен DH5 Alpha арасындағы негізгі айырмашылық мынада: BL21 негізінен ақуызды экспрессиялау үшін пайдаланылатын протеаза тапшылығы бар гендік инженериядан жасалған сауатты E. coli жасушасы, ал DH5 Alpha - негізінен recA1 мутациясы бар гендік инженерияланған құзыретті E. coli жасушасы. плазмидті түрлендіру үшін.
Е. coli рекомбинантты ақуыз өндірісі үшін таңдаулы белгілі организмдердің бірі болып табылады. Бұл жылдар ішінде ең танымал өрнек платформасына айналды. Ол сондай-ақ жасуша зауыты ретінде пайдаланылады. BL21 және DH5 Alpha - қазіргі уақытта сәйкесінше ақуыз экспрессиясы мен плазмиданың трансформациясы үшін пайдаланылатын екі генетикалық инженерияланған E. coli жасушалары.
BL21 дегеніміз не?
BL21 - протеаза тапшылығы бар генетикалық инженериядан жасалған сауатты E.coli жасушасы, негізінен ақуызды экспрессиялау үшін қолданылады. E. coli BL21 - В штаммынан алынған бактериялық жасуша. Оның Лон протеаза және ompT сыртқы мембраналық протеаза ақаулары бар. Ол әдетте рекомбинантты ақуызды экспрессиялау үшін қолданылады, себебі ол әдетте экспрессияланған ақуыздарға тұрақтылық әкеледі. BL21 pCold I-IV ДНҚ және pCold TF ДНҚ бар ақуызды экспрессиялау үшін пайдалы. Бірақ бұл сауатты E. coli жасушасы pET жүйесі сияқты T7 промоторын пайдаланатын ақуызды экспрессиялау жүйесіне арналмаған. Мұның себебі - BL21 T7 РНҚ полимеразасын білдірмейді. Бұған қоса, оны плазмидті құрастыру немесе дайындау үшін пайдалану ұсынылмайды, өйткені оның рекА мутациясы жоқ.
01-сурет: BL21
BL21 алғаш рет Студиер 1986 жылы В сызығының әртүрлі модификацияларынан кейін сипатталған. BL21 жасушаларында LON протеазасы жетіспейді, ол көптеген бөтен ақуыздарды ыдыратады. Сонымен қатар, сыртқы мембраналық протеазаны (OmpT) кодтайтын басқа ген жетіспейді, оның функциясы жасушадан тыс ақуыздарды ыдыратады. Бұл ақуыздардың жетіспеушілігі E. coli BL21 жасушаларында бөтен ақуыздың сәтті өндірілуін тудырады. Сонымен қатар, бұл жасушалардағы hsdSB мутациясы бөгде ДНҚ метилденуіне және BL21 жасушаларының бұзылуына жол бермейді.
DH5 Alpha дегеніміз не?
DH5 Альфа – негізінен плазмидті трансформациялау үшін пайдаланылатын recA1 мутациясы бар генетикалық инженериядан жасалған сауатты E. coli жасушасы. DH5 Alpha E. coli жасушаларын трансформация тиімділігін арттыру үшін американдық биолог Дуглас Ханахан гендік инженериямен жасаған. DH5 Альфа жасушасында үш түрлі мутация бар: recA1, endA1 және lacZΔM15. recA1 – глицин 160 және recA полипептидіндегі аспарагин қышқылының қалдығымен алмастыратын бір нүктелі мутация. Бұл мутация рекомбиназалардың белсенділігін тоқтатады және гомологиялық рекомбинацияны белсендірмейді. endA1 мутациясы жасушаішілік эндонуклеазаны инактивациялайды, бұл оның енгізілген плазмидті ыдыратуына жол бермейді.
02-сурет: DH5 Альфа
Сонымен қатар, lacZΔM15 мутациясы трансформацияланған жасушаларды көк-ақ скринингке мүмкіндік береді. Бұл жасушалар құзыретті жасушалар болып табылады. Олар көбінесе қажетті плазмидті енгізу үшін кальций хлоридінің трансформациясымен бірге қолданылады. Жақында жүргізілген зерттеулер нәтижесінде Hanahan әдісімен DH5 Alpha жасушасы плазмидті түрлендіру үшін ең тиімді құзыретті жасуша екені анықталды.
BL21 және DH5 Alpha арасындағы қандай ұқсастықтар бар?
- BL21 және DH5 Alpha - екі генетикалық инженерия E.coli
- Екеуі де құзыретті ұяшықтар.
- Олар әртүрлі мутациялардан тұрады.
- Екеуінің де табиғи ортасы жоқ.
- Бұлар экспрессияны зерттеу және клондау процедуралары сияқты зертханалық мақсаттар үшін пайдаланылады.
BL21 және DH5 Alpha арасындағы айырмашылық неде?
BL21 – протеаза тапшылығы бар генетикалық инженериядан жасалған сауатты E. coli жасушасы, негізінен ақуызды экспрессиялау үшін қолданылады. Екінші жағынан, DH5 Alpha – негізінен плазмидті трансформациялау үшін пайдаланылатын recA1 мутациясы бар гендік-инженерлік сауатты E. coli жасушасы. Сонымен, бұл BL21 және DH5 Alpha арасындағы негізгі айырмашылық. Сонымен қатар, BL21 E. coli жасушасында recA1 мутациясы жоқ, ал DH5 Alpha E. coli жасушасында recA1 мутациясы бар.
Келесі инфографика кесте түрінде BL21 және DH5 Alpha арасындағы айырмашылықтарды көрсетеді.
Қорытынды – BL21 және DH5 Alpha
E. coli патогенді емес штаммдарын ғалымдар зертханалық экспрессияны зерттеу және клондау мақсатында генетикалық түрде әзірлеген. BL21 және DH5 Alpha – екі гендік инженерияланған E. coli жасушалары. BL21 негізінен ақуыз экспрессиясын зерттеу үшін қолданылады. Екінші жағынан, DH5 Alpha негізінен плазмидті трансформациялау мақсатында қолданылады. Осылайша, бұл BL21 және DH5 Alpha арасындағы айырмашылықтың қысқаша мазмұны.
