Колорометриялық және флюорометриялық талдаудың негізгі айырмашылығы мынада: колориметриялық талдау ерітіндідегі түсті қосылыстардың концентрациясын анықтайды, ал флюорометриялық талдау ерітіндінің кинетикалық механизмін анықтайды.
Биохимиялық талдау - биологиялық молекуланың немесе заттың белсенділігін аналитикалық жолмен анықтайтын немесе сандық түрде анықтайтын әдіс. Бұл in vitro процесі. Колориметриялық талдау және флюорометриялық талдау - зертханаларда орындалатын жалпы биохимиялық талдаулардың екі түрі. ELISA және western blotting сияқты көптеген әдістер метаболикалық белсенділікті сандық бағалауға және ақуыздар, ферменттер және басқа да шағын молекулалар сияқты биомолекулалардың функционалдық әрекетін өлшеуге арналған күрделі биохимиялық талдаулар болып табылады. Талдаудың бұл түрлері ақуыз-ДНҚ, ақуыз-РНҚ және ақуыз-белок өзара әрекеттесулерін анықтау үшін пайдаланылады.
Колориметриялық талдау дегеніміз не?
Колориметриялық талдау – ерітіндідегі түсті қосылыстардың концентрациясын анықтайтын әдіс. Басқаша айтқанда, колориметриялық талдау реагенттер мен талданатын заттар арасындағы ферменттік немесе химиялық реакцияға байланысты түс өзгеруіне әкелетін реакция. Колориметриялық талдаулар биохимияда ферменттерді, арнайы қосылыстарды, гормондарды, антиденелерді және басқа анализаторларды сынау үшін қолданылады. Олар колориметрлерді немесе спектрофотометрлерді пайдаланады. Колориметрлер - түс сипаттамаларының объективті өлшемін қамтамасыз ету үшін түсті үлгілерді сипаттайтын құралдар. Спектрофотометр – жарықтың түсіне немесе толқын ұзындығына байланысты жарық қарқындылығын өлшейтін құрылғы.
01-сурет: Колориметриялық талдау
Колориметриялық талдау қалай жұмыс істейді?
Колориметриялық талдауда пластина ұңғымалармен байланысқан белгілі бір антиденемен дайындалады. Содан кейін үлгі қосылады. Бұл үлгінің антиденемен байланысуына мүмкіндік береді. Содан кейін анықтау зондымен әрекеттесу үшін ұңғымаларға анықтау антиденесі мен субстрат қосылады. Тоқтату ерітіндісі оқуға дейін соңында қосылады. Бланкі деп аталатын бос құдық үлгісіз қалады. Колориметриялық талдауда түс неғұрлым күңгірт болса, талданатын заттың концентрациясы соғұрлым жоғары болады. Әдетте, көрсеткішті алу үшін тек бір толқын ұзындығы қажет. Бірақ егер анықтамалық өлшем болса, екі немесе одан да көп толқын ұзындығы пайдаланылады.
Флюорометриялық талдау дегеніміз не?
Флюорометриялық талдау – ферменттік реакциялардың кинетикалық механизмін анықтайтын әдіс. Флуорометриялық талдау флуоресцентті емес субстраттан флуоресцентті өнімнің пайда болуымен немесе керісінше орындалады. Бұл талдау сонымен қатар флуоресценциялық резонансты энергияны тасымалдауды (FRET) пайдаланады, мұнда ферментативті реакция субстраттағы екі флюорофордың орнын өзгертеді, осылайша флуоресценция қарқындылығын өзгертеді.
02-сурет: Флюорометриялық талдау
Флюорометриялық талдаулар әдетте басқа талдауларға қарағанда әлдеқайда сезімтал. Науқастардың тіндеріндегі, жасушалық немесе сұйықтық үлгілеріндегі диагностикалық ферментті бағалау оның жоғары сезімталдығына байланысты артады.
Флюорометриялық талдау қалай жұмыс істейді?
Флюорометриялық талдауда пластинадағы үлгіге субстрат қосылады және флуоресценция реакциясы пластинаны оқу құралы арқылы алынады. Мұнда әрбір ұяшық бөлек өлшенеді. Мөлдір емес пластиналар флюорометриялық талдауларда қолданылады. Бұл жарықтың шашырауын азайтады. Талдаудың бұл түрі үшін екі толқын ұзындығы қажет. Бір толқын ұзындығы қозуды анықтауға арналған, ал екінші толқын ұзындығы сәуле шығаруға арналған.
Колорометриялық және флюорометриялық талдаудың қандай ұқсастықтары бар?
- Колорометриялық талдау және флюорометриялық талдау - биохимиялық талдаудың екі түрі.
- Екі талдау да медициналық диагностика үшін жүргізіледі.
- Бұл талдаулар ферментативті реакцияны қамтиды.
- Екі талдау да субстрат пен аналиттерді қамтиды.
Колорометриялық және флюорометриялық талдаудың айырмашылығы неде?
Колорометриялық талдау – ерітіндідегі түсті қосылыстардың концентрациясын анықтайтын әдіс, ал флюорометриялық талдау – ферменттік реакциялардың кинетикалық механизмін анықтайтын әдіс. Сонымен, бұл колориметриялық және флюорометриялық талдаудың негізгі айырмашылығы. Сонымен қатар, флюорометриялық талдаулар колориметриялық талдауларға қарағанда сезімталырақ; осылайша, флюорометриялық талдаулар аналиттердің көбірек анықтау мүмкіндігіне ие. Осылайша, бұл колориметриялық және флюорометриялық талдаудың тағы бір маңызды айырмашылығы. Сонымен қатар, флюорометриялық талдаулар екі толқын ұзындығын қажет етеді, ал колориметриялық талдаулар бір толқын ұзындығымен жүзеге асырылады.
Төмендегі инфографикада колориметриялық және флюорометриялық талдау арасындағы көбірек айырмашылықтар берілген.
Қорытынды – Колориметриялық және фторометриялық талдау
Биохимиялық талдау – жасушалық метаболикалық реакцияларды анықтау және сандық анықтау үшін қолданылатын аналитикалық процесс. Колориметриялық талдау және флюорометриялық талдау - биохимиялық талдаудың екі түрі. Колориметриялық талдау - реагенттер мен талданатын заттар арасындағы ферментативті немесе химиялық реакцияға байланысты түс өзгеруіне әкелетін реакция, ал флюорометриялық талдау - фермент реакцияларының кинетикалық механизмін анықтау үшін қолданылатын әдіс. Екі талдау да субстрат пен талданатын затты қамтитын ферментативті реакцияға байланысты. Флюорометриялық талдаулар колориметриялық талдауларға қарағанда сезімталырақ. Ең бастысы, флюорометриялық талдаулар екі толқын ұзындығын қажет етеді, ал колориметриялық талдаулар тек бір толқын ұзындығымен жүргізілуі мүмкін. Осылайша, бұл колориметриялық және флюорометриялық талдау арасындағы айырмашылықты қорытындылайды.
