shRNA және siRNA
РНҚ интерференциясы (RNAi) процесі кезінде мақсатты геннің экспрессиясы жоғары спецификалық және селективтілікпен жойылады. RNAi табиғи процесс болып табылады және ол шағын интерференциялық РНҚ (siRNA) және қысқа шаш РНҚ (shRNA) және екі функционалды shRNA қамтиды. Қазіргі уақытта RNAi ісіктің жеке терапиясының құралы ретінде кеңінен қолданылады. RNAi қолданбалары негізінен химиялық синтезделген қос тізбекті siRNA және вектор негізіндегі shRNA молекулаларымен орындалады. Бұл екі молекуланың функционалдық нәтижелері ұқсас болғанымен, олардың құрылымы бойынша ерекшеленеді; осылайша, әрекет етудің молекулалық механизмдері, РНҚ жолдары және осы екі молекуланың мақсаттан тыс әсерлері де ерекшеленеді.
shRNA
shRNA - бұл RNAi кезінде мақсатты ген экспрессиясын өшіру үшін қолдануға болатын тығыз шаш қыстырғышын жасайтын шағын РНҚ молекуласының тізбегі. ШРНҚ экспрессиясы вирус немесе бактерия болуы мүмкін немесе плазмидаларды жеткізу арқылы вектор арқылы жүзеге асырылады. Олар жасушалардың ядросында синтезделеді және одан әрі процестер үшін цитоплазмаға тасымалданады. Бұл молекулалардың миРНҚ-ның ұқсас жетілу жолдары бар; осылайша miRNA синтезі shRNA синтезін түсіну үшін негіз болды. РНҚ полимераза II немесе III РНҚ полимераза II немесе III промоторлары арқылы shRNA транскрипциялай алады. ШРНҚ-ны қолданудың артықшылығы - олардың ыдырауы мен айналымының салыстырмалы түрде төмен жылдамдығы. Кемшілігі - оған өрнек векторы қажет, ол кейбір қауіпсіздік мәселелерін тудыруы мүмкін.
siRNA
siRNAs - ұзындығы 20-25 жұп негіздерден тұратын қос тізбекті РНҚ молекулалары. Олар RNAi жолында комплементарлы нуклеотидтер тізбегі бар кез келген генді дыбыссыздандыру арқылы генді басу үшін қолданылады.siRNA трансфекциясы арқылы геннің нокдауны өтпелі әсерге байланысты жиі сәтсіз болады; әсіресе тез бөлінетін жасушаларда және басылу ұзаққа созылмайды. Бұл мәселені шешу үшін siRNA қысқа шаш қыстырғыш құрылымын енгізу арқылы өзгертіледі. Бұл өзгертілген молекула кейін shRNA деп аталады. Қалыпты жұмысын жалғастыру үшін shRNA-ны Dicer арқылы siRNA-ға түрлендіру керек.
shRNA мен siRNA-ның айырмашылығы неде?
• siRNA-дан айырмашылығы, shRNA қосымша шаш қыстырғыш құрылымына ие. shRNA - siRNA-ның өзгертілген нұсқасы.
• shRNA өрнек векторын қажет етеді, ал siRNA қажет емес.
• shRNA ұзақ мерзімді нокдаун үшін, ал siRNA тек қысқа мерзімді гендерді бұзу үшін пайдаланылуы мүмкін.
• siRNA-ның гендік супрессиясынан айырмашылығы, shRNA-ның басылуы ұзаққа созылады және ол сәйкес вирустық вектор арқылы енгізілсе, ол тұрақты генді өшіру әсерлерін тудыруы мүмкін.
• Қалыпты функцияларын орындау үшін shRNA-ны қайтадан siRNA молекуласына түрлендіру үшін Dicer қажет.
