Сахароза градиенті мен сахароза жастығын ультрацентрифугалау арасындағы негізгі айырмашылық мынада: сахароза градиентті ультрацентрифугалауда үздіксіз сахароза градиенті пайдаланылады, ал сахароза жастығы ультрацентрифугалауда үзіліссіз сахароза градиенті пайдаланылады.
Сахароза градиенті және сахароза жастығын ультрацентрифугалау - макромолекулалардың белгілі түрлерін бөлу үшін қолданылатын екі ұқсас әдіс. Екі әдісте де сахароза тығыздығының градиенті қолданылады. Бірақ сахароза градиентінің ультрацентрифугалауында үздіксіз тығыздық градиенті пайдаланылады, ал сахароза жастығының ультрацентрифугалауында үзіліссіз тығыздық градиенті қолданылады.
Сахароза градиентті ультрацентрифугалау дегеніміз не?
Сахароза градиентті ультрацентрифугалау – ДНҚ, РНҚ және ақуыздар сияқты макромолекулаларды фракциялау үшін қолдануға болатын әдіс. Бұл техникада бірнеше қадамдар бар. Олар сахароза градиентін дайындау, центрифугалау, бөлу және элюция. Градиентті дайындау - бұл техниканың негізгі қадамы. Бұл әдістемеде әртүрлі мөлшердегі макромолекулалардан тұратын үлгі сахароза градиентінің бағанының бетіне қабатталған. Центрифугалау кезінде әртүрлі мөлшердегі макромолекулалар сахароза градиентінің бағанасы арқылы әртүрлі жылдамдықпен шөгеді. Седиментация бірнеше факторларға байланысты, соның ішінде центрифугалау күші, өлшем пішіні және макромолекулалардың тығыздығы, градиенттің тығыздығы мен тұтқырлығы. Центрифугалаудың соңында макромолекулалар тығыздығы бойынша кеңістікте бөлінеді. Ірі макромолекулалар (тығыздығы жоғары макромолекулалар) түбіне қарай шөгеді. Ашықырақтары (тығыздығы төмен макромолекулалар) градиенттің жоғарғы жағында қалады. Сондықтан молекулалар әртүрлі жолақтар ретінде бөлінеді. Содан кейін жолақтарды бөліп, арнайы макромолекуланы сахарозадан тазарту керек.
01-сурет: сахароза градиентті ультрацентрифугалау
Қолдану жағынан бұл әдіс ДНҚ молекулаларын фракциялау үшін кеңінен қолданылады. Сахароза градиентті ультрацентрифугалау әдетте ақуыз кешенінің мөлшері мен құрамын сипаттау үшін қолданылады. Сонымен қатар, бұл әдіс mRNA ішінара тазарту үшін қолданылады.
Сахароза жастығының ультрацентрифугасы дегеніміз не?
Сахароза жастығын ультрацентрифугалау – макромолекулаларды фракциялауға мүмкіндік беретін тағы бір әдіс. Сахароза тығыздығы градиенті ультрацентрифугалаудан айырмашылығы, сахароза жастықшасының ультрацентрифугалауы үзіліссіз тығыздық градиентін пайдаланады. Сахарозаның концентрациясы жоғарыдан төменге қарай дискретті қадамдармен артады. Бұл әдістемеде бөлуге тазартылған сығындыны сахароза жастығы деп аталатын центрифугалық түтіктегі сахароза ерітіндісінің аз көлемінің үстіне қою арқылы қол жеткізіледі. Бұл жоғары жылдамдықтағы центрифугалауда жақсырақ бөлуге мүмкіндік береді. Молекулалар сахароза жастығы арасындағы жолақ ретінде бөлінгенде, ақ жолақты жинауға және тазартуға болады. Сонымен қатар, қоспаларды сахароза жастығы әдісі арқылы одан әрі жоюға болады. Сахароза жастығы әдісі түтіктің 60-70% үлгімен толтыруға мүмкіндік береді. Демек, сахароза жастығы әдісі үлгінің үлкен көлемін өңдеуге мүмкіндік береді.
Сахароза градиенті мен сахароза жастығының ультрацентрифугалауының қандай ұқсастықтары бар?
- Сахароза градиенті және сахароза жастығын ультрацентрифугалау - макромолекулалар қоспасын бөлу үшін қолданылатын екі әдіс.
- Екі әдісте де сахароза градиенті қолданылады.
- Центрифугалау екі әдісте де қадам болып табылады.
- Молекулалар әр әдісте жолақ немесе аймақ ретінде шөгеді.
Сахароза градиенті мен сахароза жастығының ультрацентрифугалауының арасындағы айырмашылық неде?
Сахароза градиентін ультрацентрифугалау – центрифуга түтігінде үздіксіз сахароза градиентін пайдаланатын әдіс, ал сахароза жастықшасын ультрацентрифугалау – үзіліссіз сахароза градиентін пайдаланатын әдіс. Осылайша, бұл сахароза градиенті мен сахароза жастығын ультрацентрифугалау арасындағы негізгі айырмашылық.
Сонымен қатар, сахароза жастығын ультрацентрифугалау үлгінің үлкен көлемін өңдеуге мүмкіндік береді, ал сахароза градиентті ультрацентрифугалау үлгінің салыстырмалы түрде аз көлемін өңдеуге мүмкіндік береді.
Төмендегі инфографиялық кестеде сахароза градиенті мен сахароза жастығын ультрацентрифугалау арасындағы көбірек айырмашылықтар келтірілген.
Қорытынды – сахароза градиенті және сахароза жастығы ультрацентрифугасы
Сахароза градиенті ультрацентрифугалау үздіксіз сахароза градиенті арқылы макромолекулаларды бөледі. Керісінше, сахароза жастығын ультрацентрифугалау қоспадағы бөлшектердің белгілі бір түрін бөлу үшін үзіліссіз сахароза градиентін пайдаланады. Сонымен, бұл сахароза градиенті мен сахароза жастығын ультрацентрифугалау арасындағы негізгі айырмашылық. Сахароза жастықшасы әдісі морфологиялық тұрғыдан бұзылмаған бөлшектерді жинауға мүмкіндік береді, өйткені ол молекулаларды түтік түбіне дейін ұсақтайтын сахароза градиентті ультрацентрифугалаудан айырмашылығы механикалық кернеуді тудырмайды. Сонымен қатар, сахароза жастығын ультрацентрифугалау сахароза градиентінің ультрацентрифугасына қарағанда үлгінің үлкен көлемін өңдеуге мүмкіндік береді.
