Негізгі айырмашылық – RNASE A және RNASE H
Рибонуклеазалар РНҚ-ны кішірек бірліктерге ыдырататын нуклеазалар. Оларды екі санатқа бөлуге болады; эндорибонуклеазалар және экзорибонуклеазалар. Эндорибонуклеаза – бір тізбекті немесе қос тізбекті РНҚ-ны ыдырататын эндонуклеаза. Ол РНҚ полинуклеотидтік тізбегіндегі фосфодиэфирлік байланыстарды үзеді. Мысалдар RNase A, RNase III, RNase T1, RNase P және RNase H. Экзорибонуклеаза - бұл РНҚ молекуласының 5'ұшындағы немесе 3'ұшындағы терминалдық нуклеотидтерді жою арқылы РНҚ-ны ыдырататын экзонуклеаза. Мысалдар RNase R, RNase II, RNase D және RNase PH. RNASE A мен RNASE H арасындағы негізгі айырмашылық мынада: RNase A - бұл бір тізбекті РНҚ-ны кішірек компоненттерге ыдырататын панкреатикалық рибонуклеаза, ал RNase H - РНҚ-ДНҚ гибридіндегі РНҚ-ны кішірек бірліктерге бөлетін спецификалық емес фермент. гидролитикалық механизм.
RNASE A дегеніміз не?
RNase A – бір тізбекті РНҚ-ның 3' соңындағы жұпталмаған цитозин мен урацил қалдықтарын арнайы бөлетін панкреатикалық рибонуклеаза. RNase H жоғары тұз концентрациясында (0,3М немесе одан жоғары NaCl концентрациясы) жұмыс істейді. Гидролитикалық реакция екі сатыдан тұрады. Ол 2', 3' циклдік монофосфат аралық өнімі арқылы 3' фосфорланған өнім түзеді. Ол жоғары тұз концентрациясында бір тізбекті РНҚ-ға тән болса да, ол сонымен қатар төмен NaCl концентрациясында (0,3М NaCl төмен) РНҚ-ДНҚ гибридіндегі екі тізбекті РНҚ мен РНҚ-ны ыдыратуы мүмкін.
Брюс Меррифильд алғаш рет бұл ферментті синтездеді. RNase A - молекулалық зерттеулерде өте танымал фермент. Ірі қара безінің RNase A RNase A мысалы болып табылады. Және бұл зертханада қолданылатын ең төзімді ферменттердің бірі. Бұл ферменттің белсенділігі үшін кофактор қажет емес. Бұл жоғары термотұрақты фермент. RNase A – дұрыс аминқышқылдарының реті анықталған бірінші фермент және үшінші ақуыз. Бұл фермент 124 аминқышқылдары және 12600да молекулалық массасы бар өте кішкентай. Оның төрт гистидин қалдығы бар (Оның 12 және Оның 119 каталитикалық реакцияға қатысады).
01-сурет: RNase A
RNase A шикі үлгіні қайнату арқылы оқшаулауға болады. Қайнаған кезде барлық басқа ферменттер қалған RNase A ыдыратады. RNase A таңғажайып тұрақты фермент. Бұл фермент рибонуклеаза ингибиторы ақуызымен, ауыр металдармен және уридин-ванадат кешендерімен тежейді.
RNase H дегеніміз не?
RNase H – гидролитикалық реакция арқылы РНҚ-ДНҚ гибридіндегі РНҚ-ны ыдырататын спецификалық емес рибонуклеаза ферменті. RNase H РНҚ-ДНҚ гибридіндегі РНҚ-ның 3'- O-P байланысын үзеді. Сайып келгенде, ол 3'OH және 5' фосфатпен аяқталатын өнімдерді шығарады. ДНҚ репликациясында ол жаңа ДНҚ жіптері пайда болғаннан кейін РНҚ праймерін жою арқылы шешуші рөл атқарады. Зертханалық жағдайларда ол РНҚ-ДНҚ гибридіндегі РНҚ-ны ыдыратады, бірақ ДНҚ және гибридтелмеген РНҚ емес. Және бұл фермент әдетте cDNA синтезі кезінде бірінші комплементарлы ДНҚ тізбегі пайда болғаннан кейін РНҚ үлгісін жою үшін қолданылады.
02-сурет: RNase H
RNase H сонымен қатар нуклеазаны қорғау талдауларында пайдаланады. Оны мРНҚ-дан поли А құйрығын жоюға да қосуға болады. RNase H жасушаның ішіндегі және сыртындағы кодталмаған РНҚ-ны жою мүмкіндігіне ие. Металл иондары осы ақуыз белсенділігі үшін кофакторлар ретінде қажет. Хелаторды (EDTA) RNase H ферментін тежеу үшін пайдалануға болады.
RNASE A мен RNASE H арасындағы қандай ұқсастықтар бар?
- Екеуі де табиғатта ақуыз.
- Екеуі де эндорибонуклеаза
- Екеуі де РНҚ-ны бұзуы мүмкін.
- Екеуі де гидролитикалық реакциялар жасайды.
- Молекулярлық зертханалар бұл екеуін де пайдаланады.
RNASE A мен RNASE H арасындағы айырмашылық неде?
RNASE A және RNASE H |
|
| RNase A – жоғары тұз концентрациясында бір тізбекті РНҚ-ның жұпталмаған цитозин мен урацил қалдықтарының 3’ ұшын арнайы ажырататын панкреатикалық рибонуклеаза. | RNase H – гидролитикалық реакция арқылы РНҚ-ДНҚ гибридіндегі РНҚ-ны ыдырататын спецификалық емес рибонуклеаза ферменті. |
| РНҚ ыдырауының табиғаты | |
| RNase A жоғары тұз концентрациясында бір тізбекті РНҚ-ны айырады. | RNase H РНҚ-ДНҚ гибридіндегі РНҚ-ны ыдыратады. |
| Белсенділік үшін кофакторлардың қажеттілігі | |
| RNase A оның белсенділігі үшін кофакторларды қажет етпейді. | RNase H белсенділігі үшін кофакторлар ретінде металл иондары қажет. |
| Ақуыз белсенділігінің ингибиторлары | |
| Рибонуклеаза ингибиторы ақуызы, ауыр металдар және уридин-ванадат кешендері РНҚ-А белсенділігін тежейді. | Хелатор (EDTA) RNase H белсенділігін тежейді. |
| ДНҚ репликациясында РНҚ праймерін жою | |
| RNase A ДНҚ репликациясында РНҚ праймерін жою үшін пайдаланылмайды. | RNase H ДНҚ репликациясында РНҚ праймерін жою үшін пайдаланылады |
| Комплементарлы ДНҚ (C-DNA) синтезіндегі ДНҚ үлгісін жою | |
| RNase A қосымша ДНҚ (C-DNA) синтезі кезінде РНҚ үлгісін жою үшін пайдаланылмайды. | RNase H комплементарлы ДНҚ (C-DNA) синтезі кезінде РНҚ үлгісін жою үшін пайдаланылады. |
| Олигоға (dt) гибридтенген мРНҚ-дағы поли-А-құйрықты жою | |
| RNase A олигоға (dt) гибридтелген мРНҚ-дағы «поли-А құйрығын» жою үшін пайдаланылмайды. | RNase H олигоға (dt) гибридтелген мРНҚ-дағы «поли-А құйрығын» жою үшін пайдаланылады |
Қорытынды – RNASE A және RNASE H
Рибонуклеазалар РНҚ-ны кішірек бірліктерге бөлуге қабілетті нуклеаза ферменттері. Олардың екі түрі бар; эндорибонуклеазалар және экзорибонуклеазалар. Эндорибонуклеаза - бұл бір жіпті немесе қос тізбекті РНҚ-ны ыдырату қабілеті бар эндонуклеаза. Және ол РНҚ полинуклеотидтік тізбегіндегі фосфодиэфирлік байланысты үзеді. RNase A және RNase H - екі эндорибонуклеаза. RNase A - жоғары тұз концентрациясында бір тізбекті РНҚ-ның 3' ұшында жұпталмаған цитозин мен урацил қалдықтарын арнайы бөлетін ұйқы безінің рибонуклеазасы. RNase H – гидролитикалық реакция арқылы РНҚ-ДНҚ гибридіндегі РНҚ-ны ыдырататын спецификалық емес рибонуклеаза ферменті. Бұл RNase A мен RNase H арасындағы айырмашылық.
PDF жүктеп алу RNASE A және RNASE H
Сіз осы мақаланың PDF нұсқасын жүктеп алып, сілтеме жазбасына сәйкес офлайн мақсаттарда пайдалана аласыз. PDF нұсқасын мына жерден жүктеп алыңыз RNASE A және RNASE H арасындағы айырмашылық
