FPLC мен HPLC негізгі айырмашылығы - FPLC - ақуыздар, нуклеотидтер және пептидтер сияқты үлкен биомолекулаларды тазартатын сұйық хроматография түрі, ал HPLC - шағын молекулалық қосылыстарды бөлетін сұйық хроматография түрі.
Сұйық хроматография - үлгіні жеке құрамдас бөліктерге бөлу үшін қолданылатын әдіс. Бұл бөліну нақты үлгілердің жылжымалы және стационарлы фазалармен әрекеттесуіне байланысты болады. Үлгідегі құрамдас бөліктер сұйық хроматографиядағы жылжымалы фазаға әр компоненттің жақындығына қарай бөлінеді. Жылжымалы фаза мен үлгі баған арқылы өткенде үлгінің құрамдас бөліктері УК-VIS спектроскопиясы арқылы анықталатын жолақтарға бөліне бастайды. Сондықтан FPLC және HPLC сұйық хроматография әдістерінің екі түрі болып табылады.
FPLC дегеніміз не?
FPLC – ақуыздар, нуклеотидтер және пептидтер сияқты үлкен биомолекулаларды тазартатын сұйық хроматография түрі. Жылдам ақуыз сұйық хроматографиясы (FPLC) алғаш рет Швецияда 1982 жылы Pharmacia компаниясымен әзірленді және сатылды. Ол көбінесе ақуыз қоспаларын талдау немесе тазарту үшін қолданылады. Бұл қозғалатын сұйықтыққа (жылжымалы фаза) және кеуекті қатты материалға (стационарлық фаза) үлгі құрамдастарының ұқсастық принципіне негізделген. FPLC-де жылжымалы фаза буфер, ал стационарлы фаза моншақтардан тұратын шайыр болып табылады. Ол әдетте цилиндрлік шыныға немесе пластикалық бағанға оралған көлденең байланысқан агарозадан тұрады.
01-сурет: FLPC (жылдам ақуыз сұйық хроматографиясы) аппараты
FLPC стратегиясының көпшілігінде ион алмастырғыш шайыр пайдаланылады. Демек, қызықтыратын ақуыз шайырмен зарядты әрекеттесу арқылы байланысады. FLPC техникасы сонымен қатар екі буферді пайдаланады: буфер 1 (жұмыс істейтін буфер) және буфер 2 (элюция буфері). Бастапқыда буферді іске қосу және үлгі қоспасы баған арқылы өткенде, қоспадағы қызықтыратын ақуыз шайырмен заряд әрекеттесуі арқылы байланысады. Бірақ қызықтыратын ақуыз диссоциацияланады және процестің соңында элюция буфері баған арқылы өткенде, элюция буферіндегі ерітіндіге оралады. Кейінірек ерітінді (қызықты протеинді қамтитын элюант) тұз концентрациясы мен ақуыз концентрациясын өлшейтін екі детектордан өтеді. Әрбір ақуызды элюциялау кезінде ол анықтау кезінде «шың» болып көрінеді және оны әрі қарай пайдалану үшін жинауға болады.
HPLC дегеніміз не?
HPLC – шағын молекулалық қосылыстарды бөлетін сұйық хроматография түрі. 1969 жылы бірінші HPLC коммерциялық түрде Уотерс корпорациясында, АҚШ-та өндірілді. Жоғары өнімді сұйық хроматографияда (HPLC) еріткіштегі (жылжымалы фаза) үлгі қоспасы (аналит) жоғары қысымда хроматографиялық орау материалы (стационарлық фаза) бар колонка арқылы айдалады. Үлгі қоспасы гелий немесе азоттың қозғалатын газ ағыны арқылы тасымалданады.
02-сурет: HPLC (өнімділігі жоғары сұйықтық хроматографиясы)
Үлгі қоспасындағы стационарлық фазамен ең аз әрекеттесетін немесе жылжымалы фазамен ең көп әрекеттесетін компоненттер бағаннан тезірек шығады. Екінші жағынан, үлгі қоспасындағы стационарлық фазамен ең көп әрекеттесетін немесе жылжымалы фазамен әрекеттесуінің ең аз мөлшері бар компоненттер бағаннан баяу шығады. Жоғарыда келтірілген өзара әрекеттесу принципіне сүйене отырып, үлгі қоспасының компоненттерін бөлуге болады. Сонымен қатар, құрал детекторы бағаннан шығатын үлгі қоспасының әрбір құрамдас бөлігін анықтайды. HPLC қоршаған ортаны және биологиялық үлгілерді препараттар, токсиндер немесе пестицидтер сияқты белгілі қосылыстардың бар немесе жоқтығын тексеру үшін қолданылады. Ол фармацевтика, қоршаған орта, криминалистика және химия сияқты әртүрлі салаларда қолданылады.
FPLC және HPLC арасындағы қандай ұқсастықтар бар?
- FPLC және HPLC сұйық хроматография түрлері болып табылады.
- Екеуі де биологиялық үлгілерді бөлу және анықтау үшін пайдаланылады.
- Олардың сұйық жылжымалы фазасы және қатты стационарлық фазасы бар.
- Екі әдіс те үлгі арқылы өту үшін бағанды пайдаланады.
- Бұл әдістер үлгіні бөлу және анықтау үшін сорғыларды, детекторларды, клапандарды және бағдарламалық құралды пайдаланады.
FPLC және HPLC арасындағы айырмашылық неде?
FPLC – ақуыздар, нуклеотидтер және пептидтер сияқты үлкен биомолекулаларды тазарту үшін қолданылатын сұйық хроматография түрі. HPLC - сұйық хроматографияның бір түрі, ол шағын молекулалық қосылыстарды бөлу үшін қолданылады. Сонымен, бұл FPLC мен HPLC арасындағы негізгі айырмашылық. Сонымен қатар, FPLC рН және өткізгіштік мониторларын, сондай-ақ фракциялық коллекторларды пайдаланады. Керісінше, HPLC рН және өткізгіштік мониторлары мен фракция жинағыштарын пайдаланбайды.
Төмендегі инфографика кесте түрінде FPLC және HPLC арасындағы көбірек айырмашылықтарды көрсетеді.
Қорытынды – FPLC және HPLC
Хроматография - қоспадан компоненттерді бөлу үшін қолданылатын зертханалық аналитикалық әдіс. Ол баған хроматографиясы, газ хроматографиясы, сұйық хроматография, ион алмасу хроматографиясы және т.б. сияқты бірнеше түрге бөлінеді. FPLC және HPLC сұйық хроматография әдістерінің екі түрі болып табылады. FPLC - ақуыздар, нуклеотидтер және пептидтер сияқты үлкен биомолекулаларды тазарту үшін қолданылатын сұйық хроматографияның бір түрі. Екінші жағынан, HPLC - сұйық хроматографияның бір түрі, ол шағын молекулалық салмақ қосылыстарын бөлу үшін қолданылады. Осылайша, бұл FPLC мен HPLC арасындағы айырмашылықтың қысқаша мазмұны.
